外泌體的形成過程

人體內(nèi)多種細胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。當其由宿主細胞被分泌到受體細胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結(jié)合，進而活躍靶細胞細胞內(nèi)的信號通路。二是在細胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結(jié)合，從而活躍細胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進行鑒定。外泌體的形成過程

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。安徽外泌體質(zhì)譜外泌體普遍參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細胞生理活動。

Exosome，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。2015年，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出，越來越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個新型的研究熱點，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。

流式細胞技術(shù)是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應(yīng)抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現(xiàn)對外泌體的定量。但流式細胞技術(shù)檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發(fā)生外泌體囊泡聚集時將導(dǎo)致一次觀察到多個顆粒，從而導(dǎo)致數(shù)據(jù)不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結(jié)合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預(yù)期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯(lián)抗體中。在流式細胞術(shù)之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯(lián)的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體的提取的方式：超速離心法。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時會發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運動，實現(xiàn)顆?？梢暬?。然后使用Stokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)的干擾。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。羅麗芬集團 外泌體

對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預(yù)后分析。外泌體的形成過程

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細胞都能分泌外泌體，但是不同細胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質(zhì)運輸與信息傳遞，調(diào)控細胞生理活動。同時，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細胞轉(zhuǎn)化、促進瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內(nèi)通路。外泌體的形成過程

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