nta鑒定外泌體

質(zhì)膜的連續(xù)內(nèi)陷較終導(dǎo)致多泡體的形成，多泡體可與細(xì)胞內(nèi)的其他囊泡和細(xì)胞器交叉，從而增加了外泌體成分的多樣性。根據(jù)細(xì)胞來源的不同，細(xì)胞外囊泡，包括外泌體，可以包含細(xì)胞的許多成分，包括DNA、RNA、脂質(zhì)、代謝物、胞質(zhì)和細(xì)胞表面蛋白。目前產(chǎn)生外泌體的生理目的尚不清楚，需要進(jìn)一步研究。一個(gè)推測的作用是外泌體可能從細(xì)胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定。較近的研究也表明外泌體中特定細(xì)胞成分的功能、靶向、機(jī)制驅(qū)動(dòng)的積累，提示它們在調(diào)節(jié)細(xì)胞間通訊中發(fā)揮作用。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。nta鑒定外泌體

外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合，有文獻(xiàn)報(bào)道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內(nèi)體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內(nèi)體?，F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運(yùn)輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來源)、CD86(抗原提呈細(xì)胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）。外泌體的提取的方式：超速離心法。外泌體純度檢測方法外泌體提取在短時(shí)間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長時(shí)間保存可以放在-20度或-80度保存。

外泌體的基本信息：1、外泌體的大?。和饷隗w的直徑約40-150nm。2、從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個(gè)，近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。6、外泌體的細(xì)胞源：人體中幾乎所有類型的細(xì)胞均能產(chǎn)生外泌體。7、外泌體具有異質(zhì)性，即使是同一種細(xì)胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區(qū)別。8、外泌體的存在：外泌體幾乎存在于所有的組織、細(xì)胞間隙、體液中。9、外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng)，實(shí)現(xiàn)顆?？梢暬Ｈ缓笫褂肧tokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體，因此無法排除其他物質(zhì)干擾。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。

磁珠免疫法分離外泌體：將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面，然后將磁珠與樣品共孵育，使外泌體特異性結(jié)合到磁珠上形成磁珠-外泌體復(fù)合物，再用蒸餾水或者PBS沖洗，結(jié)尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是，珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體，從而提高了分離效率。此外，使用磁珠時(shí)，樣品起始體積沒有上限，而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL，且ELISA洗脫雜質(zhì)時(shí)容易造成孔間交叉污染。當(dāng)將磁珠法與金標(biāo)準(zhǔn)外泌體分離方法進(jìn)行比較時(shí)，磁珠法可分離出更純凈的外泌體，特異性高、速度更快，并且不需要昂貴的儀器。另外，與其他分離方法相比，磁珠法不影響外泌體形態(tài)。但是采用磁珠法時(shí)，外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域。乳液外泌體提取試劑盒公司

利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。nta鑒定外泌體

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達(dá)到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復(fù)等。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，能比較好的保護(hù)其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細(xì)胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實(shí)驗(yàn)外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。nta鑒定外泌體

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