外泌體的沉淀

細胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細胞、成纖維細胞和間充質細胞中分離出的診療性外泌體可對靶細胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對靶細胞的影響可能是通過不同的進入或相互作用機制來控制的。完整的外泌體的進入可能包括受體介導的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進入或外泌體信號的誘導可能涉及配體受體誘導的細胞內(nèi)信號或融合，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細胞質中。疾病的進展和對診療的反應可以通過外泌體的多組分分析來確定。外泌體的沉淀

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎，它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍。乳液提取試劑盒廠家外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉移準備轉移前微環(huán)境。用肺轉傾向的肉瘤細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的肉瘤細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉有關，而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取，進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預測肉瘤轉移的部位傾向性的診斷指標。

密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細胞成分（例如過氧化物酶體，線粒體和核內(nèi)體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當施加離心力時，樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度，該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過分餾收集，密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經(jīng)涉及瘤子診療領域、醫(yī)學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。

外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域。外泌體還顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)病）方面的潛力。但是，在實際應用外泌體之前，需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發(fā)大規(guī)模生產(chǎn)質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。另外，在研究和評估外泌體的副作用和功效時，必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。外泌體給藥途徑：給藥途徑是獲得所需功效的重要參數(shù)。外泌體可以通過多種方法給藥，但是，靜脈內(nèi)給藥是較常用的途徑。通過利用增強通透性和保留（EPR）效應，在荷瘤動物中靜脈內(nèi)遞送外來體似乎是有用的。在某些容易達到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中，外泌體療法的給藥途徑是瘤內(nèi)注射。在疾病部位直接注射外泌體的優(yōu)點是可以特異性地運送裝載的藥物。另外口服給藥，腹腔給藥，皮內(nèi)給藥和鼻內(nèi)給藥途徑已成功用于外泌體遞送。外泌體膜含有MHC-1/2蛋白，能綁定特異性的肽鏈。干細胞外泌體提取試劑盒成分

外泌體通過內(nèi)體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉運至靶細胞。外泌體的沉淀

外泌體提取在短時間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進行分裝，分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法：外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進行鑒定。l、透射電鏡鑒定法：簡稱TEM，適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察，即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法：簡稱NTA，該方法能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測速度快，檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。外泌體的沉淀

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