海洋生物外泌體circRNA測序

在20世紀(jì)80年代，外泌體被描述為從網(wǎng)織紅細(xì)胞分泌的內(nèi)體來源的囊泡。人們對這些細(xì)胞外囊泡的興趣逐漸增加，因為它們似乎參與了很多細(xì)胞過程。外泌體攜帶蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和RNAs，介導(dǎo)體內(nèi)不同細(xì)胞類型之間的細(xì)胞間通訊，從而影響正常和病理狀態(tài)。只有近，科學(xué)家才認(rèn)識到將外泌體與其他類型的細(xì)胞外囊泡分開的困難，這排除了特定功能對不同類型分泌的囊泡的明確歸因。為了闡明這個復(fù)雜但正在發(fā)展的科學(xué)領(lǐng)域，該綜述著重于外泌體和其他分泌的細(xì)胞外囊泡的定義。討論了它們的生物發(fā)生，分泌及其后續(xù)的命運，因為它們的功能依賴于這些重要過程。外泌體屬于胞外囊泡類，除了外泌體之外細(xì)胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。海洋生物外泌體circRNA測序

透射電子顯微鏡（TEM）和掃描電子顯微鏡（SEM）是用于評估外泌體形態(tài)、大小和表型的的兩種常見的電子顯微鏡。SEM和TEM均使用電子束產(chǎn)生高分辨率的亞微米顆粒放大圖像，以區(qū)分外泌體與殘留在樣品中相似大小的非外泌體顆粒，該方法還可用于檢查樣品的純度。TEM與SEM之間的區(qū)別在于檢測電子類別，在SEM中，電子與樣品中的粒子相互作用時會發(fā)生散射，捕獲并檢測散射的電子，從而生成粒子圖像。但是，在TEM中，不與粒子相互作用的電子穿過樣品，并使用熒光屏進行檢測。電子顯微鏡下外泌體大小不一，通常呈茶托樣的圓形或橢圓形。采用電子顯微鏡檢測外泌體時對樣品的預(yù)處理和制備要求較高，外泌體的提取方法和品質(zhì)會對電鏡結(jié)果造成影響；另外樣品的準(zhǔn)備階段比較復(fù)雜，不適合進行大量快速的測量；而且由于樣本經(jīng)過了干燥、固定以及冷凍等預(yù)處理和制備過程，對生物樣本的結(jié)構(gòu)會造成一定的破壞，從而影響觀察的效果，無法準(zhǔn)確測量外泌體濃度。安徽植物外泌體鑒定磁珠免疫法分離的外泌體，生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。外泌體質(zhì)譜外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。

被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為腫細(xì)胞的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的腫細(xì)胞細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的腫細(xì)胞細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的腫細(xì)胞細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素（integrin）表達譜，整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān)，而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取，進而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測腫細(xì)胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。外泌體的提取的方式：PS親和法。

外泌體能攜帶多種生物活性分子循環(huán)于血液／體液中并介導(dǎo)長距離的細(xì)胞間通訊，中流來源外泌體富含的蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)等分子能夠反映其來源細(xì)胞的生理及病理狀態(tài)，外泌體特殊的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)能保護其內(nèi)RNA等分子免于降解，因此，檢測中流外泌體成為液體活檢一個明顯優(yōu)勢。臨床試驗研究表明，外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測等方面都具備較好的應(yīng)用價值，正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物標(biāo)志物和可能的靶向藥物載體。隨著技術(shù)的進步，組學(xué)時代的到來，大規(guī)模蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)被聯(lián)合應(yīng)用于篩選和揭示多種ai癥細(xì)胞外囊泡的標(biāo)志物。外泌體的提取的方式：過濾離心。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質(zhì)，在體內(nèi)參與細(xì)胞通訊、細(xì)胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程，與多種疾病的發(fā)生和進程密切相關(guān)。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能，使得它具有潛在的應(yīng)用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)，另一方面也可以作為診療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究，應(yīng)選用血漿還是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液體，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子，以及多了比較多凝血產(chǎn)物。纖維蛋白原可轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發(fā)現(xiàn)血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。1983年，外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)。細(xì)菌提取試劑盒步驟

外泌體可參與到機體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化等方方面面。海洋生物外泌體circRNA測序

各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達，由其決定外泌體被運輸往哪一種細(xì)胞，期望開發(fā)利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩(wěn)定，同時外囊泡所含的蛋白質(zhì)和RNA被外泌體的脂質(zhì)雙層膜所包被也不會分解。另外在從體液中提取外泌體后，體液可長期穩(wěn)定保存，因此外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標(biāo)記。外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來源的外泌體，其與正常細(xì)胞來源外泌體在結(jié)構(gòu)分子上的差異倍受矚目，并作為癥狀早期診斷技術(shù)，應(yīng)用于與癥狀進展相關(guān)的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標(biāo)記，髓液中的外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。海洋生物外泌體circRNA測序

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