海洋生物外泌體NTA

外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān)，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點(diǎn)或分子標(biāo)志物。對(duì)外泌體的研究，將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制，為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持。外泌體可以通過(guò)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和miRNAs進(jìn)行細(xì)胞間交流，從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境。細(xì)胞內(nèi)多泡體（MVBs）與細(xì)胞膜融合，釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外，被其他細(xì)胞攝取，通過(guò)細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物，在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動(dòng)。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng)、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過(guò)程。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合。海洋生物外泌體NTA

目前，在各種健康與疾病模型中都發(fā)現(xiàn)，外泌體通過(guò)分子信息傳遞扮演著重要的角色。外泌體還越來(lái)越多地被認(rèn)為是疾病的生物標(biāo)志物和預(yù)后因子，具有重要的臨床診斷和治理意義。除此之外，它們還有潛力被用于臨床，作為基因和藥物遞送的載體。健康人和多種疾病的患者會(huì)將含有不同RNA和蛋白質(zhì)成分的外泌體釋放到體液循環(huán)中，因其特殊性，外泌體可以作為生物標(biāo)志物來(lái)對(duì)疾病進(jìn)行檢測(cè)。例如，從血液或尿液中分離的外泌體可以用作病癥、心臟病的診斷和預(yù)后的指標(biāo)。湖南CD9外泌體慢病毒包裝外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過(guò)程中去除不必要的蛋白質(zhì)。

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）：將其中一種針對(duì)外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達(dá)抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內(nèi)容物洗掉，并使用另一種抗體檢測(cè)固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，甚至可以進(jìn)行定量。但是，此方法需要通過(guò)超速離心或超濾對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理。同樣，流場(chǎng)-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測(cè)器相結(jié)合已被用于分析外泌體的大小和純度。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn)，也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心，這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí)，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準(zhǔn)備工作繁雜，耗時(shí)，量少。膜受體的識(shí)別是外泌體細(xì)胞反應(yīng)的基礎(chǔ)，它可能活躍受體并隨后導(dǎo)致相關(guān)信號(hào)通路的活躍。不同類別的外泌體囊泡有三個(gè)征：表面具涂層的膜泡、內(nèi)含纖維的膜泡、電子致密囊泡。

外泌體作為疾病診斷的標(biāo)志物具有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì):(1)與正常細(xì)胞相比，病變細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體在分泌量和內(nèi)容物方面存在明顯差異。病變的細(xì)胞和組織能夠產(chǎn)生更多外泌體。(2)由于特殊的生成方式，外泌體的組成不同于來(lái)源細(xì)胞。其內(nèi)包含的一些特異性蛋白質(zhì)能夠揭示外泌體的起源、結(jié)構(gòu)和運(yùn)輸方式，有利于深入了解外泌體的產(chǎn)生機(jī)制。(3)病變細(xì)胞分泌的外泌體通過(guò)胞吐的過(guò)程進(jìn)入血液、尿液等體液，囊泡狀結(jié)構(gòu)能夠保護(hù)外泌體內(nèi)部生物分子不受體液中蛋白酶、磷酸酶、核酸酶等干擾，有利于保持其結(jié)構(gòu)完整和生物活性，通過(guò)對(duì)此類體液進(jìn)行分析可以實(shí)現(xiàn)疾病的無(wú)創(chuàng)或微創(chuàng)檢測(cè)。外泌體可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。細(xì)胞上清外泌體iTRAQ

外泌體與各種疾病的相關(guān)性被檢測(cè)出，特別是血液中釋放的病細(xì)胞來(lái)源的外泌體。海洋生物外泌體NTA

外泌體的提取分離的方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費(fèi)時(shí)，且回收率不穩(wěn)定（可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層，是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)。海洋生物外泌體NTA

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