外泌體的形成

膜封閉的囊泡釋放到周圍環(huán)境中已經(jīng)成為近幾年來越來越受關注的問題。令人信服的證據(jù)表明囊泡可交換復雜的信息有助于這種興趣的興起。但是，也已經(jīng)清楚，不同類型的分泌囊泡共存，具有不同的細胞內起源和形成模式，因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細胞內的多泡小體中形成，并且當這些多泡小體與質膜融合時分泌到細胞外。有趣的是，不同的分子家族已被證明參與細胞內形成外泌體及其隨后的分泌，這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。隨著今后的研究發(fā)展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應用。外泌體的形成

在運輸DOX的研究中，Wei等選擇了已經(jīng)在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞，通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b，這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合，使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經(jīng)靶向性處理的外泌體用DiR染料標記，并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內，觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經(jīng)出現(xiàn)在中流組織處，在注射2h后外泌體的含量高，而未經(jīng)靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟，幾乎很少到達中流組織處，說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。唾液外泌體提取試劑盒價格外泌體可以直接進入受體細胞影響細胞功能。

已經(jīng)有許多關于外泌體作用的報導，根據(jù)這些現(xiàn)象實驗中，從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體，在活內是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。確認外泌體生理作用的單獨方法就是明確外泌體的釋放機制，通過促進或壓制釋放機制，分析會引起何種生理作用，這是進一步研究的發(fā)展方向。甚至活內的外泌體動態(tài)（哪個外泌體遷移至何處）也會成為今后需要努力研究的重要課題。實際上，用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體，其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較，PS親和法提取的外泌體，其蛋白特異性檢測可高出10~100倍以上，幾乎沒有混入外泌體以外的蛋白，回收量高，操作重復性好。

外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個關鍵的檢查點：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合，這三個檢查點都包含在內體相關的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結構的表面，通過招募效應因子來調節(jié)相應膜結構的囊泡運輸，例如，在內體溶酶體運輸網(wǎng)絡中，RAB5調節(jié)早期內體的形成及相互融合；內體膜上RAB5到RAB7的轉換調節(jié)早期向晚期內體的轉變；RAB7調節(jié)晚期內體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs；RAB27調節(jié)MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內吞的膜蛋白，特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體，定位到內體和MVEs，通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解，此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調控。外泌體產生于細胞中的多泡體。

Pascucci等將包含有紫杉醇的間充質細胞來源外泌體與胰腺ai細胞共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)裝載紫杉醇的間充質細胞外泌體具有很強的抗中流增殖效果。Tian等為降低免疫原性與毒性，采用小鼠未成熟樹突狀細胞所產生外泌體作為藥物載體。同時為實現(xiàn)外泌體運輸?shù)陌邢蛐?，使細胞表達能夠識別乳腺ai細胞的外泌體膜蛋白Lamp2b(lysosomeasso[1]ciatedmembraneglycoprotein2b，溶酶體相關膜蛋白2)。并采用電穿孔的方法，在純化所得的小鼠未成熟樹突狀細胞外泌體中載入阿霉素。結果表明該外泌體能夠特異性的將阿霉素傳遞給中流組織，抑制中流生長且無明顯毒性。外泌體能向病變細胞輸送功能性物質，所以有很大潛力作為基因和藥物遞送的載體。外泌體的形成

超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。外泌體的形成

外泌體有很多潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：如何修飾外泌體的靶向性：缺氧瘤細胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內募集；此外，還可通過在外泌體膜表面設計與靶細胞特異性結合的抗體、配體或受體來實現(xiàn)。如何提高藥物裝載效率：目前主要有①前裝載方法（首先將藥物加載到母細胞中，隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細胞外，常用的方法如轉染、共孵育等）；②后裝載方法（直接將藥物加載到外泌體中，例如孵育、電穿孔、超聲、擠出、凍融循環(huán)等）；③其他裝載方法（主要是通過生物工程修飾母細胞來實現(xiàn)）。如何實現(xiàn)外泌體的大量生產：目前大規(guī)模生產外泌體的方法主要是自發(fā)生產和非自發(fā)生產。外泌體的形成

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