外泌體分離

外泌體是由細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的晚期內(nèi)泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細(xì)胞外環(huán)境的一種直徑30-100nm的微型囊泡，其形態(tài)規(guī)則，呈圓形或橢圓形杯狀結(jié)構(gòu)，不同類型細(xì)胞分泌的外泌體具有很多共性，包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白，如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等，表面為類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層，具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質(zhì)等生物活性分子，并在細(xì)胞外環(huán)境穩(wěn)定存在，而且通過傳遞供體細(xì)胞信息，調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細(xì)胞分泌，妊娠期母體血清中存在表達(dá)胎盤堿性磷酸酶（placentalalkalinephosphatase,）的胎盤來源外泌體，并且在妊娠中發(fā)揮重要的作用。外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達(dá)基底層起效。外泌體分離

外泌體在各種疾病的診斷和治理中的應(yīng)用研究火熱。外泌體的復(fù)雜性，為疾病檢測和監(jiān)測提供了一個多指標(biāo)的診斷窗口。此外，能夠向病變細(xì)胞輸送功能性物質(zhì)的特性使外泌體有潛力作為基因和藥物遞送的載體。有研究總結(jié)了從外泌體中篩選的生物標(biāo)志物，可用于疾病的診斷、預(yù)后及治理。外泌體在生物液體中寬泛分布，包括血液、尿液、唾液、胸腹水、腦脊液、膽汁、乳汁以及淚液等，其復(fù)雜的內(nèi)容物被認(rèn)為是疾病診斷的無創(chuàng)或微創(chuàng)生物標(biāo)志物，具有檢測包括病癥在內(nèi)的許多病理狀況的潛力，可以用于對心血管疾病和病癥等多種疾病的診斷和監(jiān)測。血漿外泌體提取試劑盒應(yīng)用外泌體本身的惰性相當(dāng)高，但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能。

外泌體是細(xì)胞間信息傳遞的重要“信使”,可通過三種方式介導(dǎo)細(xì)胞通訊:(1)外泌體以旁分泌的方式與靶細(xì)胞相互作用,通過受體–配體作用黏附到靶細(xì)胞表面,隨后被內(nèi)吞入靶細(xì)胞,或直接將內(nèi)容物釋放到靶細(xì)胞內(nèi),從而激huo靶細(xì)胞;(2)外泌體的胞外膜蛋白可以被蛋白酶切割,產(chǎn)生的片段可以與靶細(xì)胞的細(xì)胞表面受體結(jié)合,從而激huo靶細(xì)胞;(3)外泌體還可以與靶細(xì)胞直接接觸發(fā)生膜融合,導(dǎo)致外泌體中的蛋白和核酸非選擇性轉(zhuǎn)移到目標(biāo)細(xì)胞,從而引起靶細(xì)胞的響應(yīng)。通過介導(dǎo)細(xì)胞間的通訊,外泌體不jin能夠參與多種生理過程,比如消除胞內(nèi)陳舊分子、呈遞抗原、分化調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞或髓樣細(xì)胞以抑制免疫反應(yīng),而且還可以參與疾病形成的病理過程,如通過與受體細(xì)胞的相互作用傳播病原物質(zhì)、促進(jìn)中流轉(zhuǎn)移過程中的血管生長和中流細(xì)胞遷移。

在Rameshwar等的研究中，采用轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細(xì)胞的方法，使外泌體載有anti-miR-9。在進(jìn)行間充質(zhì)細(xì)胞和多形性成角質(zhì)細(xì)胞瘤(GBM)細(xì)胞間anti-miR-9傳遞的實驗時，發(fā)現(xiàn)兩種細(xì)胞不僅可以通過縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細(xì)胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現(xiàn)，而非經(jīng)GJIC傳遞的anti-miR-9，顯示出外泌體在運載miRNA進(jìn)行基因zhiliao時的潛力。利用外泌體進(jìn)行GBM的zhiliao不只停留在體外細(xì)胞實驗上，也已經(jīng)有相關(guān)的體內(nèi)zhiliao報道。外泌體被工程化改造后，具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。

外泌體是新型治理劑，瘤轉(zhuǎn)移是一個包括病細(xì)胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復(fù)雜過程。外泌體能夠影響這個級聯(lián)反應(yīng)的每一步，因此可作為瘤治理的靶點。瘤細(xì)胞在轉(zhuǎn)移到其他組織時需要在間質(zhì)細(xì)胞間移動并到達(dá)血管中，在這個過程中，瘤細(xì)胞外泌體通過纖維連接蛋白促進(jìn)瘤細(xì)胞的運動性，再通過蛋白酶促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解、血管生成，進(jìn)而促進(jìn)瘤轉(zhuǎn)移。多數(shù)瘤細(xì)胞對轉(zhuǎn)移的組織具有指向性，而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子，如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性，而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。外泌體提純方法中，超速離心法和聚合物沉淀法（市售試劑盒）混入多種雜質(zhì)。江蘇外泌體攝取

外泌體可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化等方方面面。外泌體分離

外泌體能攜帶多種生物活性分子循環(huán)于血液／體液中并介導(dǎo)長距離的細(xì)胞間通訊，中流來源外泌體富含的蛋白質(zhì)、核苷酸、脂質(zhì)等分子能夠反映其來源細(xì)胞的生理及病理狀態(tài)，外泌體特殊的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)能保護(hù)其內(nèi)RNA等分子免于降解，因此，檢測中流外泌體成為液體活檢一個明顯優(yōu)勢。臨床試驗研究表明，外泌體在多種疾病的早期診斷、療效和預(yù)后監(jiān)測等方面都具備較好的應(yīng)用價值，正逐漸成為臨床診療中新的、理想的生物標(biāo)志物和可能的靶向藥物載體。隨著技術(shù)的進(jìn)步，組學(xué)時代的到來，大規(guī)模蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)被聯(lián)合應(yīng)用于篩選和揭示多種ai癥細(xì)胞外囊泡的標(biāo)志物。外泌體分離

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