肥大細胞外泌體

目前，提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法，但這些方法混有非常多的雜質，必須慎重分析得到的是否是外泌體。超速離心法存在操作繁雜、回收量不穩(wěn)定，不能用于定量分析、必須使用昂貴的超速離心機、無法進行多樣品分析等問題。因此外泌體研究相對困難，需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術。因此，日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白，制備Tim4細胞外域與磁珠結合的“Tim4磁珠”。Tim4通過磷酯酰絲氨酸（PS）法特異性結合Tim4蛋白和磁珠，再經過含有EDTA的洗脫緩沖液進行分離，提取高純度的完整外泌體。外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合，進而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。肥大細胞外泌體

外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200nm，形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。microRNA(miRNA)是一種大小約21—23個堿基的單鏈小分子RNA，是由具有發(fā)夾結構的約70—90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成，不同于siRNA（雙鏈）但是和siRNA密切相關。microRNA通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體（RISC）降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，從而在轉錄后水平調控蛋白表達。microRNA在物種進化中相當保守，在動物、植物等中發(fā)現(xiàn)的microRNA表達均有嚴格的組織特異性和時序性。microRNA在細胞生長和發(fā)育過程中起多種作用，包括調控發(fā)育、分化、凋亡和增殖等。植物提取試劑盒原理有望在外泌體和微囊泡生理功能的分析研究上起重大貢獻。

Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進一步純化胎盤相關外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進行2次沉淀。經過多次實驗反復驗證，確定同時表達外泌體標志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。

雖然外泌體作為藥物載體具有生物兼容性、穩(wěn)定性和內在靶向性等潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：選擇何種細胞作為外泌體的供體：如DCs來源的外泌體可用于免疫治理，因其富含組織相容復合物（MHC）及T細胞共刺激分子，能在體內喚醒T淋巴細胞，進而抑制瘤細胞增殖；骨髓來源的間充質干細胞（MSCs）來源的外泌體對KRAS基因有抑制作用；γδT細胞、自然殺傷細胞（NK）、瘤細胞等均有研究報道可作為載藥級別外泌體的細胞來源。外泌體主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體，經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中 。

由于這些胞外囊泡（EV）與生理和病理狀況之間的關系，人們對EV的興趣呈指數(shù)增長。EVs對新型診斷和臨床轉化有很大希望。近的研究已經將這些交流所需的一些任務歸結為細胞外囊泡（如外泌體和微泡），主要參與髓鞘膠質細胞和神經元之間的相互信號傳遞從而促進神經元存活、由小膠質細胞介導的免疫應答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認為是神經變性疾病和腦病擴散的重要因素。這些細胞外囊泡功能為以前無法識別的神經系統(tǒng)內跨細胞相互作用增加了新方式。外泌體在化療藥物的促轉移過程中具有重要的作用。牛奶提取試劑盒應用

外泌體分析會引起何種生理作用，這是進一步研究的發(fā)展方向。肥大細胞外泌體

外泌體即細胞分泌的直徑約40-100nm的微小膜泡，多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。一開始被當做細胞排泄物，但是近幾年，研究發(fā)現(xiàn)外泌體可謂是小身體大作用。種瘤發(fā)生轉移后，如何靶向呈遞藥物一直是種瘤醫(yī)治中的一個巨大挑戰(zhàn)。發(fā)表于NanoLett的一項研究中，研究人員利用外泌體制備藥物的遞送系統(tǒng)（LD-MDS），并取得成功。在這項研究中，研究人員將相關藥物錨定在活巨噬細胞膜上，細胞自身相關蛋白酶響應開啟并將藥物轉載進入外泌體，順利遞送至肺轉移灶并且轉化為納米囊泡和次級納米囊泡，促進轉移性4T1病細胞的有效內化和細胞死亡。之后，受損的4T1病細胞可以釋放次級納米囊泡和游離藥物分子，再破壞鄰近的病細胞。研究顯示，LD-MDS對體內直徑小于100μm的肺轉移病灶顯示出優(yōu)異的靶向效率，并顯著壓制肺轉移。肥大細胞外泌體