外泌體提取實驗

外泌體有很多潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應(yīng)用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：如何修飾外泌體的靶向性：缺氧瘤細胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內(nèi)募集；此外，還可通過在外泌體膜表面設(shè)計與靶細胞特異性結(jié)合的抗體、配體或受體來實現(xiàn)。如何提高藥物裝載效率：目前主要有①前裝載方法（首先將藥物加載到母細胞中，隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細胞外，常用的方法如轉(zhuǎn)染、共孵育等）；②后裝載方法（直接將藥物加載到外泌體中，例如孵育、電穿孔、超聲、擠出、凍融循環(huán)等）；③其他裝載方法（主要是通過生物工程修飾母細胞來實現(xiàn)）。如何實現(xiàn)外泌體的大量生產(chǎn)：目前大規(guī)模生產(chǎn)外泌體的方法主要是自發(fā)生產(chǎn)和非自發(fā)生產(chǎn)。人體內(nèi)多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體，包括干細胞、免疫細胞、內(nèi)皮細胞、及平滑肌細胞等。外泌體提取實驗

Knepper等通過對透射電鏡得到的200個囊泡進行粒徑分析，結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35～40nm，磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5～1/10。透射電鏡結(jié)合免疫金標記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息，有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機制與來源。動態(tài)光散射(dynamiclightscattering，DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis，NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動態(tài)光散射通過檢測散射光的強度計算得到顆粒粒徑，而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個粒子的運動軌跡計算得到樣品濃度、粒徑分布等信息。外泌體提取實驗外泌體的異質(zhì)性決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)要根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標組織的特點等進行針對性的調(diào)整。

液體活檢是一種非侵入性的血液檢測突破性技術(shù)，能早期快速地檢測中流及其病灶或者轉(zhuǎn)移過程中釋放到血液中的循環(huán)中流細胞（circulatingtumorcell，CTC）、循環(huán)中流DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）和中流外泌體等中流組分。中流外泌體作為液體活檢的一個重要組成，基于其內(nèi)容物成分多樣和穩(wěn)定等優(yōu)勢，正成為中流標志物相關(guān)研究的熱點。中流來源納米大小的外泌體具有易通過血腦屏障、天然的歸巢特性、雙分子層脂質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性和高效的生物相容性等特征。因此，中流外泌體正成為中流靶向zhiliao理想的載體，尤其是工程化外泌體更表現(xiàn)出很好的中流靶向干預(yù)和增強藥物zhiliao的效果。

在利用外泌體運輸PTX進行抗中流的研究中，由于間充質(zhì)干細胞可以歸巢(homing)至中流細胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸，因此Pessina等采用間充質(zhì)干細胞SR4987作為分泌外泌體的母代細胞，而后將SR4987與PTX共混，使SR4987分泌的外泌體含有PTX，再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來，研究其對體外人胰腺ai細胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能，小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047～0.095mg/mL之間時可以誘導(dǎo)中流細胞凋亡50%，這種抑制效果與純PTX對體外ai細胞的抑制效果相當。利用外泌體將siRNA和抗藥劑等運輸?shù)侥繕思毎小?/p>

要使外泌體在臨床上得以更加廣fan的應(yīng)用，仍然需要更加深入的研究:(1)外泌體的提純方式主要是超速離心，這種提純方式效率較低，耗費時間長并且相對昂貴，并不適宜在臨床上應(yīng)用。(2)外泌體雖然具有一定的靶向性，但這種靶向性較弱，不足以解決中流的靶向zhiliao問題。通過在外泌體表面表達特異性肽的方法可以為上述問題的解決提供較為有效的途徑。(3)在外泌體的載藥fang式方面，現(xiàn)在常用的電穿孔法雖更具優(yōu)勢，但往往會對外泌體或藥物的完整性產(chǎn)生影響，轉(zhuǎn)染外泌體法不能保證基因類藥物全部進入外泌體內(nèi)而不是粘附在外泌體表面，存在著安全隱患。(4)外泌體作為細胞分泌物質(zhì)，其本身可調(diào)性并不如脂質(zhì)體以及聚合物基藥物載體。細胞表面受體表達不同，外泌體對受體細胞的影響可能不同，可能誘導(dǎo)細胞存活，也可能誘導(dǎo)凋亡或免疫調(diào)節(jié)等。江蘇外泌體脂質(zhì)組學(xué)

外泌體的遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān)，在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點或分子標志物。外泌體提取實驗

小鼠骨髓樹突狀細胞產(chǎn)生的外泌體中含有的中流多肽能夠啟動特異性細胞毒性T淋巴細胞，根除或抑制小鼠中流的生長，這一發(fā)現(xiàn)為中流免疫zhiliao提供了新的研究思路。另外，樹突狀細胞來源的外泌體也能夠通過激huo其他免疫細胞誘導(dǎo)抗中流反應(yīng)，從而抑制中流。B細胞分泌的外泌體包含MHCⅡ-多肽復(fù)合物，能夠激huo人和小鼠抗原特異性T細胞，從而實現(xiàn)調(diào)節(jié)免疫響應(yīng)的功能。細菌或病原體感ran的巨噬細胞外泌體能夠刺激巨噬細胞和中性粒細胞分泌炎性介質(zhì)，在增強機體免疫監(jiān)督方面發(fā)揮重要作用。外泌體提取實驗