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本發(fā)明的特征在于:應(yīng)用本發(fā)明的血液基因組DNA提取方法在10分鐘內(nèi)提取血液基因組可用于熒光PCR擴(kuò)增檢測,主要步驟如下。(1)將**管顛倒混勻后,吸取100μL血液或者吸取100μL口腔拭子樣本保存液至,加入200μL的核酸釋放劑,渦旋混勻,然后5000g離心30s,棄上清,獲得細(xì)胞沉淀。(2)將步驟(1)中得到的血液細(xì)胞沉淀中再加入200μL核酸釋放劑,渦旋振蕩1min,至沉淀完全散開,然后5000g離心30s,棄上清。(口腔拭子樣本則無需進(jìn)行此步驟)。(3)向步驟(2)所獲得的沉淀中加入50μL核酸釋放劑,渦旋振蕩1~2min;室溫放置5min,12000g離心30s,取上清液即為提取的基因組DNA;所述的核酸釋放劑組成為20mM~80mM的氫氧化鈉溶液、~、~、~、~***鈉、~3%甲酰胺;所述熒光PCR反應(yīng)液組成為ROX、TaqMan探針、引物、dNTP、dUTP、UDG、BSA、聚合酶及緩沖液。附圖說明圖1為實(shí)例1檢測的8份血液樣本平行實(shí)驗(yàn)的熒光擴(kuò)增曲線圖。圖2~圖5為實(shí)施例1提供的四份血液樣本的三次平行實(shí)驗(yàn)的熒光擴(kuò)增曲線圖。圖6為實(shí)施例2對(duì)比實(shí)例1提供的對(duì)8份血液樣本平行實(shí)驗(yàn)的熒光擴(kuò)增曲線圖。具體實(shí)施方式為了使本領(lǐng)域技術(shù)領(lǐng)域人員更好地理解本申請(qǐng)中的技術(shù)方案。廣東鼻拭子口腔拭子在使用口腔拭子**0分鐘,記得不要進(jìn)食喝水用藥、也不要吸YAN喝酒,以免影響采樣操作。
專業(yè)用在基因檢測行業(yè),細(xì)胞學(xué),遺傳學(xué),疾病篩查,檢測,基因DNA,分子診斷,個(gè)人檢測診斷,大健康,醫(yī)學(xué),生物,制藥等行業(yè)**的海綿拭子【基因檢測DNA海綿拭子】:基因檢測口腔DNA樣本采集【產(chǎn)品結(jié)構(gòu)、組成】:一次性使用基因采樣袋由基因海綿采樣拭子、細(xì)胞保存液管組成?!臼褂谜f明】:本基因采樣作為基因檢測的采樣工具,其用途是采集和保存口腔黏膜上皮脫落細(xì)胞。采樣拭子由海綿頭、采樣套桿和采樣推桿三部分組成。使用方法將密封包裝的采樣拭子拆封后,將有海綿頭一端深入口腔內(nèi),用海綿頭刮拭口腔內(nèi)壁,可將口腔黏膜上皮脫落細(xì)胞及部分唾液吸在采樣頭表面。在刮拭后可單手持采樣拭子,用拇指抵住采樣推桿,將采樣頭頂入采樣管內(nèi),擰緊采樣管蓋,便可在常溫下保存。一個(gè)采樣頭對(duì)應(yīng)一個(gè)采樣管,套桿及推桿可丟棄。操作如下圖:【產(chǎn)品特點(diǎn)】:本采集袋具有采集方便、攜帶方便、一次性使用,無交叉污染的特點(diǎn)?!居猛尽浚罕井a(chǎn)品用于采集人體口腔黏膜上皮脫落細(xì)胞?!咀⒁馐马?xiàng)】:使用本產(chǎn)品前詳細(xì)閱讀使用說明書;本產(chǎn)品為‘一次性使用’不可重復(fù)使用,用后請(qǐng)立刻丟棄;本產(chǎn)品禁止存放在0、有害、有腐蝕性物質(zhì)的環(huán)境;本產(chǎn)品在儲(chǔ)運(yùn)過程中不得被重壓,并保存包裝完好。
深圳市華晨陽科技有限公司為中國香港晨陽國際集團(tuán)旗下企業(yè),本工廠專業(yè)生產(chǎn)經(jīng)營:醫(yī)療器械(TOC取樣拭子、***采樣試子、DNA采樣拭子、宮頸采樣試子、咽喉采樣試子、鼻腔采樣拭子、婦女***采樣刷、細(xì)胞保存液、細(xì)胞培養(yǎng)基、液基保存液、皮膚外用涂藥器、微生物取樣捧、陰道沖洗器.)工業(yè)凈化產(chǎn)品:(無塵布、擦拭布/紙、凈化棉簽等);電子產(chǎn)品。通過ISO9001,ISO14001,ISO13485,CE,CFDA認(rèn)證產(chǎn)品應(yīng)用于:微生物,制藥,醫(yī)療器材,食品,微電子,光學(xué),光電,磁盤,硬盤,半導(dǎo)體,晶圓,機(jī)電,實(shí)驗(yàn)室,研究所,汽車造船工業(yè),航空航天領(lǐng)域等各個(gè)行業(yè),覆蓋范圍廣,主要產(chǎn)品有:無塵擦拭布、紙,無塵靜電防護(hù)手套,清潔凈化無塵棉簽各種型號(hào),***粘塵滾筒粘塵墊,防靜電工作服套件,防靜電包裝袋,無紡布口罩、衣服、帽子、鞋套,清潔卡套件,除靜電設(shè)備及凈化設(shè)備工程等。代理日本W(wǎng)TR各種規(guī)格指套,美國Kimberly-ClarkKimtechPure各種擦拭布/紙,防護(hù)產(chǎn)品,日本東麗TORAYSEEMKMC 各種清潔抹布,savinaminimax無塵布,日本OZU&BEMCOT各種無塵擦拭紙,3M各種防護(hù)口罩,日本三洋HUBY-340系列無塵棉簽,RubyStick系列凈化棉簽,F(xiàn)OAMTEC系列無菌棉簽??谇皇米邮且粋€(gè)形狀長得跟牙刷很像的拭子。
所有反應(yīng)孔背景信號(hào)好、Ct值都在19~25之間,熒光擴(kuò)增曲線呈典型的S型,說明本發(fā)明實(shí)例1提供的血液樣本快速提取法用于熒光PCR擴(kuò)增的方法具有較好的可行性。將四份不同來源不同的人血液樣本進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增檢測,每份樣本平行三次,結(jié)果分別如圖2、圖3、圖4、圖5所示,由圖可見,每個(gè)樣本的平行實(shí)驗(yàn),其曲線的Ct值很接近且≤25。說明本發(fā)明實(shí)例提供的血液樣本快速提取法用于熒光PCR擴(kuò)增的方法有可靠的重復(fù)性以及較好的均一性。實(shí)施例2與市場現(xiàn)有的血液基因組提取試劑盒產(chǎn)品對(duì)比。本發(fā)明的具體步驟如下:將**管顛倒混勻后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸釋放劑(20mM~80mM的氫氧化鈉溶液、~、~、~、~***鈉、~3%甲酰胺),渦旋混勻,然后5000g離心30s,棄上清,獲得細(xì)胞沉淀;然后再加入200μL核酸釋放劑,渦旋1min至沉淀完全散開,5000g離心30s,棄上清;向細(xì)胞沉淀中加入50μL核酸釋放劑,渦旋振蕩1min,室溫放置5min,12000g離心30s,取上清液即為提取的血液基因組DNA;取上清液3μL,加入到配制好的熒光PCR反應(yīng)液,于ABI7500熒光PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。選用某公司的血液基因組提取試劑盒作為方法比對(duì),具體操作過程:將取血管顛倒混勻數(shù)次,吸取200μL血液于。將拭子伸進(jìn)口腔,在口腔內(nèi)壁來回掛拭多次,然后將拭子自然晾干,包裝起來送往檢測機(jī)構(gòu)檢測即可。河北泡沫口腔拭子源頭廠家
然后把裝有采集管的自封袋以及送檢登記表常溫送運(yùn)輸?shù)焦?。遼寧可定制口腔拭子生產(chǎn)產(chǎn)家
下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。實(shí)施例1一種可用于熒光PCR擴(kuò)增的快速提取全血基因組的方法中的熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)液包括濃度或含量和組分如表1。將所述的熒光PCR擴(kuò)增反應(yīng)液對(duì)血液樣本中的管家基因***DH進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增,方法如下:將**管顛倒混勻后,吸取100μL血液至,加入200μL的核酸釋放劑,渦旋混勻,然后5000g離心30s,棄上清,獲得細(xì)胞沉淀;然后再加入200μL核酸釋放劑,渦旋1min至沉淀完全散開,5000g離心30s,棄上清;向細(xì)胞沉淀中加入50μL核酸釋放劑,渦旋振蕩1min,室溫放置5min,12000g離心30s,取上清液即為提取的血液基因組DNA;取上清液3μL,加入到配制好的熒光PCR反應(yīng)液,于ABI7500熒光PCR儀中進(jìn)行擴(kuò)增。所述的熒光PCR擴(kuò)增程序如下。步驟①:50℃,2min,循環(huán)1次。步驟②:95℃,5min,循環(huán)1次。步驟③:95℃15s,55℃30s(收集熒光),循環(huán)40次。結(jié)果分析:平行擴(kuò)增的熒光定量PCR反應(yīng)中,陰性對(duì)照無擴(kuò)增,說明反應(yīng)體系正常,無污染。用本發(fā)明處理了10份來源不同的人血液樣本,然后用人管家基因***DH引物進(jìn)行熒光PCR擴(kuò)增檢測,結(jié)果如圖1所示。 遼寧可定制口腔拭子生產(chǎn)產(chǎn)家
深圳市華晨陽科技有限公司是一家集基因檢測、分子診斷、干細(xì)胞研發(fā)生產(chǎn)銷售于一體的國家高新技術(shù)企業(yè)。公司擁有20多項(xiàng)**,部分專利已經(jīng)轉(zhuǎn)化應(yīng)用于市場。公司于2016在深圳沙井恒昌榮高新產(chǎn)業(yè)園建立新的GMP廠房及研發(fā)實(shí)驗(yàn)室。產(chǎn)品主要應(yīng)用于基因檢測、醫(yī)院、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、生物制藥、出入境檢驗(yàn)檢疫、診斷試劑、公安刑偵法醫(yī)等。近年來,公司不斷加大自主研發(fā)投入,積極引進(jìn)人才和技術(shù),并與國內(nèi)外多家科研院所以及醫(yī)院有著緊密合作,促進(jìn)產(chǎn)學(xué)研成果轉(zhuǎn)化。
公司通過中國CFDA,美國FDA,歐盟CE,以及SGS,TUV實(shí)地認(rèn)證,擁有進(jìn)出口權(quán),本著“質(zhì)量至上,求實(shí)創(chuàng)新,質(zhì)量服務(wù),合作共贏”產(chǎn)品遠(yuǎn)銷全球,并獲得廣大客戶一致認(rèn)可。
主營產(chǎn)品:一次性使用病 毒采樣管,植絨拭子,口腔拭子,咽拭子,一次性采樣拭子,細(xì)胞保存液,病 毒保存液,病 毒滅活液,唾液采集器,采樣盒,拭子套裝.尼龍植絨拭子,聚丙烯拭子