杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢。

***定量

常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行***定量。

樣品需求量低

在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。

高靈敏度

ddPCR本質上是將一個傳統(tǒng)的PCR反應分成了數(shù)萬個**的PCR反應，在這些反應中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應的干擾，擴增基質效應大大減小。 分辨率——低至0.1倍基因表達差異。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

       目前數(shù)字PCR技術在臨床領域已經(jīng)有著非常***且***地應用，例如在病原微生物檢測中的應用：HBV檢測、HIV檢測、甲型流感病毒檢測等；在產(chǎn)前診斷中的應用：13/18/21號染色體三倍體檢測、遺傳性耳聾檢測、地中海貧血檢測及優(yōu)生五項的病毒檢測等；在**靶向***相關基因檢測中的應用：肺*EGFR基因突變、ALK基因融合檢測、結直腸*KRAS、BRAF基因突變檢測、乳腺*HER2基因擴增檢測、神經(jīng)膠質瘤IDH基因突變檢測等。以**靶向***相關基因檢測為例，在**形成的超早期,會出現(xiàn)**細胞的壞死和凋亡,這些凋亡或壞死的**細胞會釋放其DNA進入外周血,因此通過分析循環(huán)血液中是否含有**特異的游離DNA就可以達到**早期篩查的目的。然而此時DNA含量極低,對檢測的靈敏度和精確性要求極高，目前只有數(shù)字PCR技術可以檢測出來。另外進行個體化***時,需要對基因組樣本進行分析,此時利用數(shù)字PCR技術也能**提高結果的可信性,進而建立合理***方案。南京廣州永諾數(shù)字PCR品牌不依賴Ct值，無需標準曲線。

二代測序輔助建庫

       目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法，在均相溶液中，當擴增引物增加時，由于擴增引物之間的相互作用，從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增，將可降低引物間相互作用，提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。

CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證

       CRISPR-Cas9技術的發(fā)明，是基因編輯技術的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。

MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點：

一、適應性廣，靈活性高

1、理論上可覆蓋qPCR（熒光定量PCR)的所有應用

2、樣本多樣性，樣本通量可達96個樣本，支持靈活設定

3、開放式平臺，支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。

二、靈敏度高，準確性高

1、***定量——無需依賴標準曲線

2、采用微滴式技術高達100,000個的微滴

3、線性范圍達到6個數(shù)量級，靈敏度高達萬分之一

三、可分析復雜混合物

1、準確度不完全依賴于擴增效率

2、雙通道熒光檢測，支持EvaGreen染料及探針法

3、支持多重數(shù)字PCR

四、操作簡單，使用方便

1、全封閉防污染設計，一鍵式自動化操作。

2、可選全中文分析軟件 樣本多樣性，樣本通量可達96個樣本，支持靈活設定。

       數(shù)字PCR是一種核酸分子***定量技術。當前核酸分子的定量有三種方法，光度法基于核酸分子的吸光度來定量；，Ct值就是指可以檢測到熒光值對應的循環(huán)數(shù)；數(shù)字PCR是***的定量技術，基于單分子PCR方法來進行計數(shù)的核酸定量，是一種***定量的方法。主要采用當前分析化學熱門研究領域的微流控或微滴化方法，將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中，每個反應器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號，沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。永諾生物MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR儀超越行業(yè)的10萬個微滴數(shù)，保證泊松分布所需要的充分的樣本量。JUE對定量數(shù)字PCR正規(guī)代理

率先行業(yè)的10萬個微滴數(shù)，保證泊松分布所需要的充分的樣本量。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

       微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后，逐個對每個微滴進行檢測，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。

與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢

       不依賴Ct值或內參基因，即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術讓數(shù)字PCR更低成本，且更實用。

杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR原理

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浚和儀器將始終以行業(yè)特點為立足點，以客戶需求為導向，不斷地提高自身專業(yè)技術能力，不停地完善客戶服務質量，在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神，力求與客戶共同進步，為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。