廣東數(shù)字PCR

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢。

***定量

常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，由于樣品測定在各種條件上不會(huì)完全一致，會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響，可以進(jìn)行***定量。

樣品需求量低

在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢。

高靈敏度

ddPCR本質(zhì)上是將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個(gè)**的PCR反應(yīng)，在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾，擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。 分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。廣東數(shù)字PCR

MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR應(yīng)用范圍如下：a.動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫，動(dòng)物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測；b.降低篩查成本、縮短檢測周期，適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估；適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監(jiān)測等；適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導(dǎo)；c.可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。d.基因表達(dá)差異監(jiān)測單細(xì)胞研究：測序、PCRe.無創(chuàng)產(chǎn)前篩查：低成本、快速、傳染性疾病：HBV、HIV、CO VID-19定量深圳廣東數(shù)字PCR哪家好正壓生成油包水的液滴。

數(shù)字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進(jìn)行稀釋,分配到大量 的反應(yīng)單元中,使每個(gè)反應(yīng)單元中只有單個(gè)模板分子,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),擴(kuò)增結(jié)束后對(duì)每個(gè)反應(yīng)室的熒光信號(hào)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴(kuò)增后定量,因此不依賴擴(kuò)增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標(biāo)準(zhǔn)曲線,準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可以實(shí)現(xiàn)***定量分析。由于其獨(dú)特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。

**個(gè)體化診療

通過檢測T790M位點(diǎn)突變情況，可以更好地評(píng)估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平臺(tái)ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限，沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變。這個(gè)時(shí)候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度，此外，dPCR***定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了，可以監(jiān)控突變含量變化，做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。

2.）基因表達(dá)分析

伊馬替尼（Imatinib）可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血病（CML）患者延長生存期，但是臨床上發(fā)現(xiàn)，伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對(duì)CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測定，結(jié)果檢測下限可以達(dá)到0.001%，顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢 20微升體系生成100,000微滴。

研究方向

甲基化含量鑒定

作為表觀遺傳學(xué)研究中重要的一個(gè)研究方向——甲基化程度分析，現(xiàn)階段有不同的方法或技術(shù)來進(jìn)行研究：如傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽處理后的克隆測序統(tǒng)計(jì)法、抗體檢測法、定量PCR檢測法等。這些方法皆因方法學(xué)的問題而不能獲得精確的定量，而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過對(duì)樣品的微滴化處理及目標(biāo)因子的***拷貝數(shù)定量，為甲基化程度的精確定量檢測提供了一種全新的技術(shù)。

*****的伴隨診斷

常用體液來源(如血液，胸腹水，唾液及尿液等)的待檢標(biāo)本中的DNA，有正常脫落體細(xì)胞和病變脫落細(xì)胞兩種來源，前者的量遠(yuǎn)大于后者。通過微液滴處理能在每個(gè)微液滴中有效減少正常體細(xì)胞DNA的干擾，實(shí)現(xiàn)**標(biāo)記物的有效檢測，如EGFR，ALK，ROS1，KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴(kuò)增檢測等，應(yīng)用于**精細(xì)醫(yī)學(xué)的伴隨診斷。 線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí)，靈敏度低至萬分之一。廣州MicroDrop-100數(shù)字PCR簡介

線性范圍達(dá)到6個(gè)數(shù)量級(jí)，靈敏度高達(dá)萬分之一。廣東數(shù)字PCR

二代測序輔助建庫目前靶向測序建庫方法包括擴(kuò)增子方法，在均相溶液中，當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí)，由于擴(kuò)增引物之間的相互作用，從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增，將可降低引物間相互作用，提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于少量模板的有效擴(kuò)增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對(duì)核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評(píng)估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。廣東數(shù)字PCR

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