青海實驗室數(shù)字PCR安裝

基因檢測**前沿的兩種方法是：高通量測序（NGS）和數(shù)字PCR(dPCR)。高通量測序技術(shù)又稱“下一代”測序技術(shù)，可以一次對幾十萬到幾百萬條DNA分子進行序列測定，功能強大，但是實驗操作較復雜，數(shù)據(jù)分析難度較大，檢測周期長，成本較高。數(shù)字PCR技術(shù)是目前**精細**靈敏的基因檢測技術(shù)，借助微液滴或微腔室，通過單個模板分子的PCR擴增，可實現(xiàn)不依賴于標準曲線和參照樣本的***定量。與NGS相比，數(shù)字PCR靈敏度高、檢測速度快、操作簡便、結(jié)果易讀、成本低廉等優(yōu)勢使其更適合臨床檢測，成為精細醫(yī)療實現(xiàn)平民化、大眾化的比較好選擇。此外，數(shù)字PCR還在基因表達差異研究、拷貝數(shù)變異(CNV)研究、低豐度DNA模板分子的精確定量、甲基化含量鑒定、二代測序輔助建庫、CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證、轉(zhuǎn)基因成分的檢測、移植排異監(jiān)控、腸道菌群分析以及***基因組檢測等眾多領域中有著優(yōu)異的應用。支持多重數(shù)字PCR，可選全中文分析軟件。青海實驗室數(shù)字PCR安裝

與常規(guī)PCR方法相比，數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢：1、能夠***定量：常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標準DNA曲線，但是由于待檢樣本與標準曲線不在統(tǒng)一體系，條件上會存在差異，另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準確性。而數(shù)字PCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可進行***定量。2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴重的樣本。3、靈敏度高：數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應體系分割成數(shù)萬個 PCR反應，這些反應可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個 反應體系中，***降低了背景信號和***物對反應的干擾，擴增基質(zhì)效應大大減小。廣東噪音小數(shù)字PCR咨詢報價油包水乳化微滴技術(shù)，在微管道中利用氣壓驅(qū)動生成十萬個微滴，單個微滴體積體積低至皮升級。

數(shù)字PCR也叫DigitalPCR（dPCR），是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說，數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值，不受擴增效率的影響，能夠直接讀出DNA的分子個數(shù)，能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份，然后再將其分配到不同的反應單元中，使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子（即DNA模板），每個單元都會對目標分子進行擴增，然后再對每個單元進行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言，傳統(tǒng)PCR或qPCR反應都是發(fā)生于同一體系當中，這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。   

二代測序輔助建庫目前靶向測序建庫方法包括擴增子方法，在均相溶液中，當擴增引物增加時，由于擴增引物之間的相互作用，從而影響擴增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴增，將可降低引物間相互作用，提高擴增效率。同時還可以實現(xiàn)對于少量模板的有效擴增，得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明，是基因編輯技術(shù)的一大突破，但如何驗證實驗是否成功，仍需要高靈敏度的檢測方法，數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團隊發(fā)明了以CRISPR為基礎的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進行高靈敏度的定性檢測，但精確定量評估時仍采取了數(shù)字PCR進行確認。線性范圍達到6個數(shù)量級，靈敏度低至萬分之一。

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言，數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:●靈敏度可達到單個核酸分子：檢測限低至0.001%，主要系為數(shù)字PCR可以實現(xiàn)靶標DNA/RNA的生物濃縮；●無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量，可對靶分子起始量進行***定量，直接獨處DNA分子 的個數(shù)；●適合環(huán)境復雜樣品的檢測：終點PCR檢測，不依賴Ct值，不依賴擴增效率，能克服PCR 劑的影響，避免樣品間的交叉 問題，適合各類復雜環(huán)境中的樣本進行 定量，如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等；雙通道熒光檢測，支持EvaGreen染料及探針法。青海實驗室數(shù)字PCR安裝

采用微滴式技術(shù)高達100,000個的微滴。青海實驗室數(shù)字PCR安裝

數(shù)字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進行稀釋,分配到大量 的反應單元中,使每個反應單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應,擴增結(jié)束后對每個反應室的熒光信號進行統(tǒng)計學分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標準曲線,準確度高、重現(xiàn)性好,可以實現(xiàn)***定量分析。由于其獨特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細胞基因表達分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領域顯示出巨大的優(yōu)勢和應用前景。青海實驗室數(shù)字PCR安裝

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