杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

       低豐度及稀有序列的精確定量

       目前對于低豐度目標序列的檢測，定量PCR、雜交、毛細管測序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾，使得檢測靈敏度及精確性都達不到精細定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下，其重復(fù)性就不是很高)， 而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過**的微滴  化處理，使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來，從而提高了檢測的靈敏度及重復(fù)性。

       此外，由于樣品微滴化處理的同時，也將樣品中可能存在的***劑進行了分裝，提高了數(shù)字PCR擴增對于***劑的耐受程度，因此可具體應(yīng)用于很多臨床樣品(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液等)中對**核酸標記物的檢測。一般而言，毛細管電泳和定量PCR的檢測靈敏度約在10%;NGS的靈敏度可達到1%;而ddPCR的檢測下限為0.001%。 單次微滴生成*需2分鐘。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

*****的實時監(jiān)控

已有數(shù)篇文章報道了使用數(shù)字PCR技術(shù)對患者***過程中的循環(huán)**DNA(ctDNA)進行檢測，實時監(jiān)控疾病進展。在非小細胞肺*、乳腺*和腸*等多種**患者中都取得了令人鼓舞的結(jié)果。與影像學(xué)及其他常規(guī)指標相比，ctDNA突變及豐度改變通常會提前數(shù)月出現(xiàn)，這樣就可以提醒醫(yī)生及時調(diào)整***方案，使患者得到更有效的***。

隨著數(shù)字PCR熒光通道的增加和多指標檢測的成熟，數(shù)字PCR將會進入更多應(yīng)用領(lǐng)域，有力推動生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)診斷、檢驗檢疫、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域的快速發(fā)展。 杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR基因表達差異的監(jiān)測。

與常規(guī)的PCR的方法相比，dPCR有很好的優(yōu)勢。

***定量

常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結(jié)果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學(xué)影響，可以進行***定量。

樣品需求量低

在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。

高靈敏度

ddPCR本質(zhì)上是將一個傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個**的PCR反應(yīng)，在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應(yīng)的干擾，擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。

dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算，從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。 數(shù)字PCR技術(shù)是公認的液體活檢領(lǐng)域靈敏度比較好的檢測方法。

       數(shù)字PCR(d PCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進行稀釋,分配到大量**的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應(yīng),擴增結(jié)束后對每個反應(yīng)室的熒光信號進行統(tǒng)計學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標準曲線,準確度高、重現(xiàn)性好,可以實現(xiàn)***定量分析。由于其獨特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細胞基因表達分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。適用復(fù)雜樣品的檢測。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR

數(shù)字PCR儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域。杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR

研究方向

無創(chuàng)產(chǎn)前篩查

       無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷, 如21號染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標本來源主要為血液，而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾，影響了檢測的準確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補充來進行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷，從而提高工作效率及節(jié)約成本。

轉(zhuǎn)基因食品或成分的檢測

       目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時采取定量PCR的標準曲線法，這種方法需要依賴于已知濃度的標準品(Certified Reference Materials Calibrants, CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標準物質(zhì)的定標工作。 杭州國產(chǎn)數(shù)字PCR

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