HAND1免疫組化

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-07-11

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng):對(duì)熒光標(biāo)記的抗體的稀釋,要保證抗體的蛋白有一定的濃度,一般稀釋度不應(yīng)超過(guò)1:20,抗體濃度過(guò)低,會(huì)導(dǎo)致產(chǎn)生的熒光過(guò)弱,影響結(jié)果的觀察。染色的溫度和時(shí)間需要根據(jù)各種不同的標(biāo)本及抗原而變化,染色時(shí)間可以從10min到數(shù)小時(shí),一般30min已足夠。染色溫度多采用室溫(25℃左右),高于37℃可加強(qiáng)染色效果,但對(duì)不耐熱的抗原(如流行性乙型腦炎病毒)可采用0-2℃的低溫,延長(zhǎng)染色時(shí)間。低溫染色過(guò)夜較37℃30min效果好的多。免疫熒光技術(shù)利用熒光染料標(biāo)記的抗體與目標(biāo)分子結(jié)合,從而實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè)。HAND1免疫組化

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基于熒光成像的技術(shù)對(duì)于查詢細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。當(dāng)與免疫化學(xué)結(jié)合時(shí),熒光成像技術(shù)的分析能力增加,增強(qiáng)了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應(yīng)用中的實(shí)用性,使其成為寶貴的工具。免疫熒光顯微鏡通過(guò)使活細(xì)胞成像能夠可視化整個(gè)細(xì)胞器,徹底改變了細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進(jìn)行細(xì)胞分析的常用熒光成像技術(shù)。免疫熒光(IF)是一種強(qiáng)大的免疫染色技術(shù),利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標(biāo)分子結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體。免疫熒光用于鑒定細(xì)胞中的細(xì)胞和組織特異性抗原;可視化蛋白質(zhì)的存在與否、細(xì)胞定位和活化狀態(tài);并分析免疫反應(yīng)。HAND1免疫組化免疫熒光技術(shù)可以用于研究肉瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。

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免疫熒光法是將免疫學(xué)方法(抗原抗體特異結(jié)合)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來(lái)研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出,從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物,再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本,熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色),可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位。

細(xì)胞免疫熒光主要用于蛋白定位研究和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光技術(shù)是利用免疫技術(shù)和熒光標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合,原理就是利用抗原-抗體反應(yīng)之后,采用熒光標(biāo)記,標(biāo)記完成后,顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)某種抗原成分的多少,從而做出一個(gè)定位研究,也可以為細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)提供一個(gè)明確的指導(dǎo),細(xì)胞免疫熒光具有敏感性強(qiáng)、特異性高、速度快的特點(diǎn),是目前比較常用的組織學(xué)技術(shù),也是比較精確的。免疫熒光染色的主要原理是利用抗原抗體之間的特異性結(jié)合來(lái)顯示目的蛋白,主要包括蛋白和一抗結(jié)合,其次是帶有熒光基團(tuán)的二抗識(shí)別并結(jié)合一抗,熒光顯微鏡下即可觀察到熒光。熒光抗體法是利用熒光標(biāo)記的抗體來(lái)追蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法。

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免疫熒光應(yīng)用范圍:其應(yīng)用范圍極其普遍,可以測(cè)定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、多肽、核酸、受體、神經(jīng)遞質(zhì)、肉瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別,又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌、藥物檢測(cè)、免疫學(xué)、血型鑒定等。免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟:洗滌:PBS洗滌5min*3次。封閉:使用封閉液對(duì)樣本進(jìn)行封閉,一般1h。加一抗:使用合適濃度的一抗與樣本4℃過(guò)夜。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。加二抗:使用間接法時(shí)需要加二抗處理,根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用合適的濃度,避光處理1h(后面步驟均需避光)。洗滌:PBS或PBST洗滌5min*3次。封片:滴一滴防淬滅劑,封片??闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。免疫熒光技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中具有普遍的應(yīng)用前景。HAND1免疫組化

免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的定位和表達(dá)水平。HAND1免疫組化

免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng):為了保證熒光染色的正確性,初次試驗(yàn)時(shí)需設(shè)置下述對(duì)照,以排除某些非特異性熒光染色的干擾。①標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照:標(biāo)本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。②特異性對(duì)照(抑制試驗(yàn)):標(biāo)本加未標(biāo)記的特異性抗體,再加熒光標(biāo)記的特異性抗體。③陽(yáng)性對(duì)照:已知的陽(yáng)性標(biāo)本加熒光標(biāo)記的特異性抗體。如果標(biāo)本自發(fā)熒光對(duì)照和特異性對(duì)照呈無(wú)熒光或弱熒光,陽(yáng)性對(duì)照和待檢標(biāo)本呈強(qiáng)熒光,則為特異性陽(yáng)性染色。一般標(biāo)本在高壓汞燈下照射超過(guò)3min,就有熒光減弱現(xiàn)象,經(jīng)熒光染色的標(biāo)本較好在當(dāng)天觀察,隨著時(shí)間的延長(zhǎng),熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸下降。HAND1免疫組化

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