北京熒光染料細(xì)胞膜

二、***成像分析：D-熒光素，鉀鹽，D-PBS,不含鈣、鎂1、配制溶液使用無菌D-PBS（w/oCa2+;Mg2+）配制D-熒光素鉀鹽溶液（15mg/ml），0.22μm濾膜過濾除菌（避光），分裝后于-20℃或-80℃冷凍保存，避免反復(fù)凍融。使用時4℃融化，實(shí)驗(yàn)前平衡至室溫（避光）2、注射量取決于注射方式，具體如下：注射方式劑量靜脈注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液腹腔注射（25-27gauge針頭）按10μl/g體重濃度，加入相應(yīng)體積的15mg/ml熒光素工作液肌肉注射（27gauge針頭）50μl，濃度為1-2mg/ml熒光素工作液鼻內(nèi)注射（pipette）50μl，濃度為3mg/ml熒光素工作液3、注射入體內(nèi)10-20min（待光信號達(dá)到**強(qiáng)穩(wěn)定平臺期），再進(jìn)行成像分析DiD，DiO，DiI，DiR和DiS 染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。北京熒光染料細(xì)胞膜

為什么要使用熒光染料？雖然不同的染色技術(shù)（即考馬斯染色、銀染色、熒光染色）可用于可視化凝膠電泳分離的蛋白質(zhì)，但使用熒光染料具有其獨(dú)特的優(yōu)勢。他們提供：高靈敏度：對于大多數(shù)分析物，熒光測量的靈敏度比吸光度測量高1000倍，即使在使用小樣本時也可以令人滿意地達(dá)到ppt（萬億分之一）的檢測限。寬線性動態(tài)范圍。輸出與樣品濃度成正比。低干擾：由于吸收光的材料數(shù)量眾多，分光光度測量通常會遇到干擾問題。在進(jìn)行熒光測量時不會遇到這個問題，因?yàn)橹挥猩贁?shù)材料具有熒光能力。高通量：熒光測量具有簡單而強(qiáng)大的協(xié)議，并且可以自動化用于高通量應(yīng)用。河北外泌體熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。

納米粒子納米顆粒是指尺寸在1到100納米之間的顆粒。由于它們的小尺寸，納米粒子通常用于不同類型的細(xì)胞和組織的熒光成像。當(dāng)今生物成像中常用的一些納米材料包括碳點(diǎn)、貴金屬納米顆粒、聚合物點(diǎn)、量子點(diǎn)和熒光摻雜二氧化硅等。在成像中，與其他分子熒光團(tuán)和探針相比，納米顆粒/納米材料具有多種優(yōu)勢，使其成為理想的選擇。除了提高亮度外，納米粒子是惰性的并且往往分布均勻，這有助于在成像過程中獲得更好的結(jié)果。此外，與各種分子熒光團(tuán)相比，納米顆粒和納米材料沒有細(xì)胞毒性，并且不受非特異性結(jié)合問題的影響。由于這些特性，大多數(shù)熒光納米顆粒（染色納米顆粒）可以內(nèi)化到細(xì)胞/組織中，并容易靶向給定部位。

異硫氰酸熒光素(FITC)是一種有機(jī)熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)中。在495/517nm處，該染料會產(chǎn)生激發(fā)/發(fā)射峰值，并可借助異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)與不同抗體結(jié)合，該基團(tuán)可以和蛋白質(zhì)上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團(tuán)相結(jié)合。而它的基本成分——熒光素，其摩爾質(zhì)量為332g/mol，常被用作熒光示蹤劑。FITC(389g/mol)是用于熒光顯微鏡技術(shù)的首批染料，且其被當(dāng)成AlexaFluor®488等后續(xù)熒光染料的發(fā)端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統(tǒng)，而該系統(tǒng)受藍(lán)色光譜中的光所激發(fā)。經(jīng)常與FITC同時使用的另一種染料是與其相似的TRITC[四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與FITC相反，TRITC并非熒光素，而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個大的共軛芳香電子系統(tǒng)，正是該系統(tǒng)引發(fā)了它們的熒光行為。還有一點(diǎn)與FITC相反，TRITC(479g/mol)由比較**長為550nm的綠色光譜中的光所激發(fā)，它的比較大發(fā)射波長為573nm。與蛋白質(zhì)（例如，抗體）結(jié)合也基于異硫氰酸鹽反應(yīng)基團(tuán)。脂溶性熒光染料cy3、cy5、cy7等。

一：染色液制備1、配制儲液：儲液用無水DMSO或無水EtOH配制，濃度1~5mM。注：未使用的儲液建議分裝后儲存在-20℃，避免反復(fù)凍融。2、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲液，配制濃度為1~5μM的工作液。注：工作液**終濃度建議根據(jù)不同細(xì)胞系和實(shí)驗(yàn)體系來優(yōu)化。建議從推薦濃度的10倍范圍內(nèi)開始比較好濃度的摸索。二：懸浮細(xì)胞染色1、加入適當(dāng)體積的染色工作液重懸細(xì)胞，使其密度為1×106/mL。2、37℃孵育細(xì)胞2~20min，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同?？梢?0min作為起始孵育時間，之后優(yōu)化體系以得到均一的標(biāo)記效果。3、孵育結(jié)束，1000~1500rpm離心5min。傾倒上清液，再次緩慢加入37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。4、重復(fù)步驟3兩次以上。非磺化花青類染料- 該組中的一些染料包括 cy3、cy3.3、cy5、cy5.5、cy7 和 cy7.5。陜西蛋白質(zhì)熒光染料

CY5熒光染料是一種被廣泛應(yīng)用于生物分子檢測和熒光成像等領(lǐng)域的高效、穩(wěn)定的熒光標(biāo)記試劑。北京熒光染料細(xì)胞膜

如何選擇的染料？

考慮到熒光染料種類繁多，您如何為您的特定應(yīng)用選擇使用哪種染料？以下是您需要考慮的一些因素?！c實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的兼容性：雖然它們可能與其他熒光團(tuán)共享一些光譜相似性，但每種染料都是***的，并且具有不同的功能、激發(fā)和發(fā)射波長、波段形狀和寬度以及光穩(wěn)定性。為確保成功，請選擇與您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)相輔相成的一種。與設(shè)備的兼容性：選擇與您正在使用的照明源相匹配的染料。在選擇合適的熒光儀器時，請考慮儀器的靈敏度、動態(tài)范圍、穩(wěn)定性和通量、信噪比和信空白比。為了獲得更好的結(jié)果，請確保染料的發(fā)射曲線與可用的檢測方法相匹配。與樣品中其他熒光材料的相容性：在雙重或三重標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中，您選擇的染料的發(fā)射和激發(fā)曲線不應(yīng)與其他熒光團(tuán)重疊。由于許多天然存在的細(xì)胞成分會以與您選擇的染料或探針相同的波長發(fā)出熒光，因此您還需要確保可以從背景自發(fā)熒光中清楚地識別所選染料產(chǎn)生的信號。 北京熒光染料細(xì)胞膜