黑龍江南京轉染試劑

為了在體外和體內可重復地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉染試劑。雖然有幾項研究已經調查了血液成分如何使脂質和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對于介導細胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進入血液后會發(fā)生不斷的變化。過多的聚合物鏈或脂質體成分不強烈附著于復合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復合物的表面。這不僅會導致顆粒的不穩(wěn)定，還會改變生物分布或促進體內***。了解在體內遞送的每個階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過程中，在***和組織的細胞外基質中，以及**終進入靶細胞時)，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于設計具有更高穩(wěn)定性的合成載體系統(tǒng)?；蚴顷栯x子聚合物作為轉染劑的主要應用。黑龍江南京轉染試劑

化學轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。基于脂質體的轉染試劑是一種化學物質，它能夠形成帶正電的脂質聚集體，這些聚集體可以與宿主細胞的磷脂雙分子層順利融合，從而允許外來遺傳物質以**小的阻力進入。另一方面，非脂質體轉染試劑可進一步分為幾類，包括磷酸鈣、樹狀大分子、聚合物、納米顆粒和非脂質體。磷酸鈣是轉染中使用的低價的化學物質之一，轉染涉及將帶正電的鈣離子(Ca2+)與帶負電的核酸結合，形成沉淀，然后被宿主細胞吸收。然而，磷酸鈣轉染的成功率較低，需要事先優(yōu)化才能達到較高的轉染效率。樹狀大分子是三維的、高度支化的有機大分子，可以與核酸形成復合物，作為一種替代的非脂質體轉染試劑，它優(yōu)于磷酸鈣。然而，使用樹狀大分子的轉染效率仍然低于病毒載體和脂質體試劑。陽離子聚合物也可以與帶負電荷的核酸形成復合物，這有助于細胞通過內吞作用吸收遺傳物質。與病毒載體相比，陽離子聚合物產生的細胞毒性較小，但效率也較低。納米顆粒由于其體積小，增強了核酸進入宿主細胞的能力，正在成為非脂質體轉染的替代選擇。黑龍江南京轉染試劑利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質體核酸重新包裝到外泌體中。

攜帶要轉染的特定核酸的載體構建可以進一步分為病毒載體或質粒載體。病毒和質粒通過存在合適的真核啟動子促進外源轉基因的表達。病毒載體可能在宿主細胞中觸發(fā)免疫原性反應，而非病毒載體的免疫原性相對較低。需要一種傳遞機制來促進靶向核酸或載體結構轉移到宿主細胞中。其中一些需要物理方法，而另一些涉及使用遞送載體，可能是脂質載體或非脂質載體，以幫助增強載體載體復合物與宿主細胞膜之間的接觸，從而促進復合物進入細胞。設計和啟動轉染試驗可能具有挑戰(zhàn)性，特別是可供選擇的轉染方法或策略種類繁多的情況下。

除了mRNA疫苗，DNA疫苗也是不錯的選擇。在聚葡萄糖、精胺(PG)偶聯(lián)物和第四代聚酰胺樹狀大分子(PAMAM G4)的幫助下，研究人員集中研究了將合成t細胞免疫原作為DNA疫苗使用的方法。他們改進了PG和PAMAM G4復合物的大小、運動性和表面電荷，然后在BALB/c小鼠中測試疫苗設計的免疫原性。根據(jù)研究結果，由于同時包裝在PG和PAMAM G4包膜中，DNA疫苗的免疫原性增加。在給予PG包被的DNA疫苗復合物的小鼠中，觀察到**強的t細胞反應，并且這些反應明顯高于給予裸DNA組合和PAMAM 4G包被的DNA組合的動物組?；瘜W轉染可分為基于脂質體或非基于脂質體。

PEI的分子量對細胞毒性和基因轉移活性有影響。由于PEI在細胞內不可降解，所以分子量越高，細胞毒性越強。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉染，但更難在細胞內釋放核酸。另一方面，PEI產生的復合物分子量降低，更難以轉染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實現(xiàn)的。然而，一些改進使PEI在應用中更加先進。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細胞毒性并保持較高的轉染效率。通過用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙?；?，或在聚合物結構中引入帶負電荷的丙酸或琥珀酸基團，可以制備出各種無毒的分支PEI衍生物。由此產生的化學物質在利用siRNA敲低靶基因方面非常成功。Severino et al.進行的研究也指出了陽離子脂質作為基因遞送納米載體的潛在毒性。黑龍江南京轉染試劑

是由非離子核酸與陽離子脂質體（CLs）表面結合，形成多層脂質-核酸復合物而形成的。黑龍江南京轉染試劑

超聲輔助轉染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉染效率成比例相關，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉染的轉染效率。在同一項研究中，超聲轉染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結果與另一項研究的結果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉染大鼠細胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉染效率的另一個因素。黑龍江南京轉染試劑