浙江siRNA轉染試劑

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場，以提高小RNA寡核苷酸轉染的效率。其中一種是通過化學修飾來提高其與靶標和阻斷外切酶活性的結合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門設計的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對宿主細胞膜具有更高的結合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個核苷酸具有額外的亞甲基橋，以增強其核糖環(huán)結構的穩(wěn)定性。其鎖定的核糖結構使得LNA比常用的寡核苷酸更短，從而使其比傳統(tǒng)的寡核苷酸表現(xiàn)出更高的效率、穩(wěn)定性和結合親和力。NA基寡核苷酸的應用已被報道用于各種生化或功能分析，涉及遞送小RNA分子，如siRNA、miRNA和piRNA。一些基于NA基的轉染不需要轉染試劑，這可以比較大限度地減少轉染過程中試劑的二次效應。研究已經(jīng)確定了陽離子脂質體（CLs）的某些特征，這些特征增強了它們在體內(nèi)轉運核酸的能力。浙江siRNA轉染試劑

脂質顆粒的加入導致內(nèi)體DNA釋放增加。Delgado等人通過在腎細胞中添加魚精蛋白，設法提高了固體脂質納米顆粒的轉染效率，但與不添加魚精蛋白的對照組相比，相同的多功能單元，DNA/魚精蛋白/SLN(固體脂質納米顆粒)，降低了HEK 293細胞系(人胚胎腎細胞)的轉染效率。這給了我們希望，通過加入必要的配體的可能性，使用納米顆粒的轉染可能會調整到給定的細胞類型。Bahrami et al.經(jīng)表明，不同種類的納米顆粒以不同的方式與細胞膜結合。形成這些鍵的差異取決于它們的球形或非球形形狀，也取決于不同納米顆粒所表現(xiàn)出的各種粘附電位以及它們進入后引起的膜形狀變化。Prabha等人的實驗表明，納米顆粒的大小對COS-1(非洲綠猴腎細胞)和HEK 293細胞系的轉染效率有***影響:使用較小的納米顆粒時，轉染效率分別是使用較大納米顆粒的27倍和4倍。在兩種分散體中，小顆粒和大顆粒的細胞攝取、表面電荷和DNA釋放是相同的，這表明使用納米顆粒進行基因傳遞的效率受到許多因素的影響，它們的使用應該根據(jù)細胞類型和應用條件進行具體調整。此外，用作納米顆粒分散劑的不同物質，如十六種不同類型納米顆粒的豬肺表面活性劑和牛血清白蛋白，對其在溶液中的團聚有***影響。江蘇siRNA轉染試劑在轉染實驗中使用對照對于確定所使用的轉染試劑和核酸的效果和效率至關重要。

在選擇合適的小RNA分子進行轉染相關功能分析之前，應先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標具有高度特異性，而miRNA具有調節(jié)多個下游靶標的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結構使其能夠與目標mRNA結合以抑制其功能，從而導致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結合以拮抗其活性，從而增加目標基因的表達。

化學轉染的效率在很大程度上取決于幾個因素，如使用的試劑類型、靶細胞的來源和性質，以及選擇的比較好DNA與試劑比例。慢病毒等病毒載體能夠攜帶大尺寸的核酸，并將其靶標傳遞給非分裂細胞和分裂細胞，因此在基因***中非常有用。有幾個因素已被證明可能影響病毒轉導的效率，如靶細胞類型、使用的啟動子類型、載體濃度和使用的轉導介質條件。在一項評估使用人類免疫缺陷病毒(HIV)和馬傳染性貧血病毒(EIAV)進行基因轉導的體外研究中，觀察到這兩種病毒在來自人類、倉鼠、貓、狗、馬和豬的不同細胞系上的不同程度的效率。在大多數(shù)細胞類型上，使用HIV的轉導效率普遍優(yōu)于EIAV，而這兩種病毒對嚙齒動物細胞的***性較弱。在同一項研究中，啟動子的類型也被認為是可能影響轉導效率的一個因素，因此含有替代CMV啟動子的內(nèi)部啟動子EF-1a的HIV在小鼠和大鼠細胞上表現(xiàn)出更高的轉導效率。陽離子聚合物是一種非病毒載體。

不同種類的納米顆粒轉染細胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉染方法相當。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉染介質所取得的轉染效果。固體脂質na-noparticles轉染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學上的***差異，在每種轉染介質中保持相同水平。然而，獲得的轉染效率低于使用商業(yè)轉染劑EscortTM 的效率，該轉染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質納米顆粒，實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。轉染是將外源核酸送入細胞的過程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。廣東轉染試劑靠譜

陽離子脂質體合成中常用的分子是中性脂質二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。浙江siRNA轉染試劑

RNA和信使RNA與DNA轉染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導入真核細胞。與涉及DNA的轉染相比，RNA轉染可能產(chǎn)生更高的轉染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉錄和轉錄后處理的情況下，RNA轉染也可能加速所需蛋白質的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質。然而，RNA轉染后，蛋白質表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差，因此在細胞內(nèi)運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調控轉錄后基因調控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉錄后調控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調控轉錄后基因表達中發(fā)揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp，可表達為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結合mRNA上的互補序列來降解它。浙江siRNA轉染試劑