高效液相色譜分離原理空間排阻(StericExclusionChromatography)空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類似于分子篩的作用,但凝膠的孔徑比分子篩要大得多,一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進行分離,而是按分子大小進行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動力學體積或分子大小有關(guān)。試樣進入色譜柱后,隨流動相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進入膠孔而受到排阻,因此就直接通過柱子,首先在色譜圖上出現(xiàn),一些很小的分子可以進入所有膠孔并滲透到顆粒中,這些組分在柱上的保留值比較大,在色譜圖上***出現(xiàn)。上海禹重實業(yè)有限公司為您提供液相色譜系統(tǒng),歡迎您的來電哦!安徽賽默飛Vanquish液相色譜系統(tǒng)
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高效液相色譜的歷史1903年俄國植物化學家茨維特(Tswett)提出“色譜法”(Chromatography)和“色譜圖”(Chromatogram)的概念。茨維特使用色譜法chromatography來描述他的彩色試驗。1930年以后,相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年,英國學者Martin和Synge基于他們在分配色譜方面的研究工作,提出了關(guān)于氣-液分配色譜的比較完整的理論和方法,把色譜技術(shù)向前推進了一大步,這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年,基于Moore和Stein的工作,離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現(xiàn),這是近代液相色譜的一個重要嘗試,但分離效率尚不理想。1960年中后期,氣相色譜理論和實踐發(fā)展,以及機械、光學、電子等技術(shù)上的進步,液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后,微處理機技術(shù)用于液相色譜,進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。1990年以后,生物工程和生命科學在國際和國內(nèi)的迅速發(fā)展,為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題,如人類基因組計劃,蛋白質(zhì)組學有HPLC作預分離等。
高效液相色譜分離原理液—固流動相為液體,固定相為吸附劑(如硅膠、氧化鋁等)。這是根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來進行分離的。其作用機制是:當試樣進入色譜柱時,溶質(zhì)分子(X)和溶劑分子(S)對吸附劑表面活性中心發(fā)生競爭吸附(未進樣時,所有的吸附劑活性中心吸附的是S),可表示如下:XmnSa======XanSm式中:Xm--流動相中的溶質(zhì)分子;Sa--固定相中的溶劑分子;Xa--固定相中的溶質(zhì)分子;Sm--流動相中的溶劑分子。當吸附競爭反應達平衡時:K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa]式中:K為吸附平衡常數(shù)。[討論:K越大,保留值越大。]液相色譜系統(tǒng),就選上海禹重實業(yè)有限公司,讓您滿意,有想法可以來我司咨詢!
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