高效液相色譜相關(guān)術(shù)語
色譜圖(chromatogram)——樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器,所得到的信號-時間曲線,又稱色譜流出曲線(elution profile)。
基線(base line)——經(jīng)流動相沖洗,柱與流動相達(dá)到平衡后,檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時間軸。
噪音(noise)——基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。
漂移(drift)——基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起,柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產(chǎn)生漂移。
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高效液相色譜分離原理
離子對
(Ion Pair Chromatography)
離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中,使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對化合物,從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示:X水相Y-水相 === X Y-有機(jī)相
式中:X 水相--流動相中待分離的有機(jī)離子(也可是陽離子);Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對(如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等);X Y---形成的離子對化合物。
當(dāng)達(dá)平衡時:
KXY = [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相[Y-]水相
根據(jù)定義,分配系數(shù)為:
DX= [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相
[討論:DX與保留值的關(guān)系]
離子對色譜法(特別是反相)解決了以往難以分離的混合物的分離問題,諸如酸、堿和離子、非離子混合物,特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。
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高效液相色譜相關(guān)術(shù)語
峰面積(peak area,A)—峰與峰底所包圍的面積。
保留時間(retention time,tR)——從進(jìn)樣開始到某個組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時間。
理論塔板數(shù)(theoretical plate number,N)——用于定量表示色譜柱的分離效率(簡稱柱效)。
分離度(resolution,R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率,表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離。
《中國藥典》規(guī)定R應(yīng)大于1.5。
拖尾因子(tailing factor,T)——T=,用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)。
《中國藥典》規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。
T1.05為拖尾峰。
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簡化維護(hù)步驟
模塊化設(shè)計無需使用工具即可進(jìn)行維護(hù),并且可以在不拆卸堆疊設(shè)備的情況下進(jìn)行維護(hù),系統(tǒng)前端的智能燈條可提供即時系統(tǒng)狀態(tài)更新。
保持實驗室整潔
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正反色譜
正相色譜法
采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環(huán)已烷),常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。
反相色譜法
一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、**、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現(xiàn)代液相色譜中應(yīng)用**為***,據(jù)統(tǒng)計,它占整個HPLC應(yīng)用的80%左右。
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