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高效液相色譜分離原理空間排阻(StericExclusionChromatography)空間排阻色譜法以凝膠(gel)為固定相。它類似于分子篩的作用,但凝膠的孔徑比分子篩要大得多,一般為數(shù)納米到數(shù)百納米。溶質(zhì)在兩相之間不是靠其相互作用力的不同來進(jìn)行分離,而是按分子大小進(jìn)行分離。分離只與凝膠的孔徑分布和溶質(zhì)的流動(dòng)力學(xué)體積或分子大小有關(guān)。試樣進(jìn)入色譜柱后,隨流動(dòng)相在凝膠外部間隙以及孔穴旁流過。在試樣中一些太大的分子不能進(jìn)入膠孔而受到排阻,因此就直接通過柱子,首先在色譜圖上出現(xiàn),一些很小的分子可以進(jìn)入所有膠孔并滲透到顆粒中,這些組分在柱上的保留值比較大,在色譜圖上***出現(xiàn)。線性達(dá) 3000 mAU,噪音級(jí)別降至 ±3 μAU,比較低分散和基線噪音。專業(yè)高效液相色譜系統(tǒng)優(yōu)惠價(jià)格
高效液相色譜相關(guān)術(shù)語(yǔ)峰面積(peakarea,A)—峰與峰底所包圍的面積。保留時(shí)間(retentiontime,tR)——從進(jìn)樣開始到某個(gè)組分在柱后出現(xiàn)濃度極大值的時(shí)間。理論塔板數(shù)(theoreticalplatenumber,N)——用于定量表示色譜柱的分離效率(簡(jiǎn)稱柱效)。分離度(resolution,R)——相鄰兩峰的保留時(shí)間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率,表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離?!吨袊?guó)藥典》規(guī)定R應(yīng)大于1.5。拖尾因子(tailingfactor,T)——T=,用以衡量色譜峰的對(duì)稱性。也稱為對(duì)稱因子(symmetryfactor)或不對(duì)稱因子(asymmetryfactor)?!吨袊?guó)藥典》規(guī)定T應(yīng)為0.95~1.05。T1.05為拖尾峰。安徽賽默飛世爾Vanquish液相色譜系統(tǒng)優(yōu)惠價(jià)格低擴(kuò)散性的10 mm 和 60 mm流通池可以為特定的應(yīng)用提供極高的靈敏度和極寬的線性。
液相色譜類型液相色譜按其分離機(jī)理,可分為四種類型--吸附色譜法、分配色譜法、離子交換色譜、凝膠色譜法吸附色譜法吸附色譜法的固定相為吸附劑,色譜的分離過程是在吸附劑表面進(jìn)行的,不進(jìn)入固定相的內(nèi)部。與氣相色譜不同,流動(dòng)相(即溶劑)分子也與吸附劑表面發(fā)生吸附作用。在吸附劑表面,樣品分子與流動(dòng)相分子進(jìn)行吸附競(jìng)爭(zhēng),因此流動(dòng)相的選擇對(duì)分離效果有很大的影響,一般可采用梯度淋洗法來提高色譜分離效率。在聚合物的分析中,吸附色譜一般用來分離添加劑,如偶氮染料、抗氧化劑、表面活性劑等,也可用于石油烴類的組成分析。
高效液相色譜的歷史1903年俄國(guó)植物化學(xué)家茨維特(Tswett)***提出“色譜法”(Chromatography)和“色譜圖”(Chromatogram)的概念。茨維特使用色譜法chromatography來描述他的彩色試驗(yàn)。1930年以后,相繼出現(xiàn)了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術(shù)。1952年,英國(guó)學(xué)者M(jìn)artin和Synge基于他們?cè)诜峙渖V方面的研究工作,提出了關(guān)于氣-液分配色譜的比較完整的理論和方法,把色譜技術(shù)向前推進(jìn)了一大步,這是氣相色譜在此后的十多年間發(fā)展十分迅速的原因。1958年,基于Moore和Stein的工作,離子交換色譜的儀器化導(dǎo)致了氨基酸分析儀的出現(xiàn),這是近代液相色譜的一個(gè)重要嘗試,但分離效率尚不理想。1960年中后期,氣相色譜理論和實(shí)踐發(fā)展,以及機(jī)械、光學(xué)、電子等技術(shù)上的進(jìn)步,液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學(xué)鍵合固定相用于液相色譜就出現(xiàn)了HPLC。1970年中期以后,微處理機(jī)技術(shù)用于液相色譜,進(jìn)一步提高了儀器的自動(dòng)化水平和分析精度。1990年以后,生物工程和生命科學(xué)在國(guó)際和國(guó)內(nèi)的迅速發(fā)展,為高效液相色譜技術(shù)提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題,如人類基因組計(jì)劃,蛋白質(zhì)組學(xué)有HPLC作預(yù)分離等。Vanquish 系統(tǒng)的分流進(jìn)樣器 HT 模塊的單瓶容量可滿足 208 次進(jìn)樣,開箱即用。
高效液相色譜法有“四高一廣”的特點(diǎn):①高壓:流動(dòng)相為液體,流經(jīng)色譜柱時(shí),受到的阻力較大,為了能迅速通過色譜柱,必須對(duì)載液加高壓。②高速:分析速度快、載液流速快,較經(jīng)典液體色譜法速度快得多,通常分析一個(gè)樣品在15~30分鐘,有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成,一般小于1小時(shí)。③高效:分離效能高??蛇x擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到比較好分離效果,比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。④高靈敏度:紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng,進(jìn)樣量在μL數(shù)量級(jí)。⑤應(yīng)用范圍廣:百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析,特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析,顯示出優(yōu)勢(shì)。⑥柱子可反復(fù)使用:用一根柱子可分離不同化合物⑦樣品量少、容易回收:樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。液相色譜系統(tǒng)選哪家?給您推薦上海禹重!進(jìn)口液相色譜系統(tǒng)采購(gòu)
增加樣品通量,節(jié)省寶貴的工作臺(tái)操作空間。專業(yè)高效液相色譜系統(tǒng)優(yōu)惠價(jià)格
高效液相色譜綜述HPLC的出現(xiàn)不過三十多年的時(shí)間,但這種分離分析技術(shù)的發(fā)展十分迅猛,應(yīng)用十分***。其儀器結(jié)構(gòu)和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示(SeeFig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置(用雙泵)、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、恒溫器、記錄儀等主要部件。高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對(duì)分子量比較大的物質(zhì),因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑,抗氧化劑、殺蟲劑、除銹劑的分析等物質(zhì)的分析。專業(yè)高效液相色譜系統(tǒng)優(yōu)惠價(jià)格