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高效液相色譜分離原理

離子對

(Ion Pair Chromatography)

離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質(zhì)分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質(zhì)離子的保留行為。其原理可用下式表示：X水相Y-水相 === X Y-有機(jī)相

式中：X 水相--流動相中待分離的有機(jī)離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X Y---形成的離子對化合物。

當(dāng)達(dá)平衡時(shí)：

KXY = [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相[Y-]水相

根據(jù)定義，分配系數(shù)為：

DX= [X Y-]有機(jī)相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相

[討論：DX與保留值的關(guān)系]

離子對色譜法（特別是反相）解決了以往難以分離的混合物的分離問題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。

一套設(shè)備可以同時(shí)實(shí)現(xiàn)在線分析與離線柱平衡再生，提升檢測器或質(zhì)譜在線利用率。新疆專業(yè)高效液相色譜系統(tǒng)廠家直銷

高效液相色譜法有“四高一廣”的特點(diǎn)：

①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時(shí)，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高速：分析速度快、載液流速快，較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時(shí)。

③高效：分離效能高。可選擇固定相和流動相以達(dá)到比較好分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。

④高靈敏度：紫外檢測器可達(dá)0.01ng，進(jìn)樣量在μL數(shù)量級。

⑤應(yīng)用范圍廣：百分之七十以上的有機(jī)化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。

⑥柱子可反復(fù)使用：用一根柱子可分離不同化合物

⑦樣品量少、容易回收：樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。

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賽默飛世爾Vanquish 超高效液相色譜系統(tǒng)產(chǎn)品簡介

Thermo Scientific? Vanquish? Duo UHPLC 系統(tǒng)，將兩套梯度流路整合在一個超高效液相系統(tǒng)里，并能實(shí)現(xiàn)三種不同工作流程（雙LC，串聯(lián)液相或LCMS質(zhì)譜前端，以及反梯度）這些工作流程可通過節(jié)約時(shí)間、減少每份樣品的成本、在不額外增加工作臺面的情況下提高儀器設(shè)備容量并更加高效地利用資源，以提升生產(chǎn)率。Vanquish Duo UHPLC 系統(tǒng)可在不影響性能、穩(wěn)定性或易用性的情況下擴(kuò)大 Vanquish 平臺的優(yōu)勢。

串聯(lián) LC 或 LC-MS應(yīng)用提**析通量 Vanquish Duo系統(tǒng)

很大程度地 提高了質(zhì)譜儀的利用率

梯度分離通常用于 LC 或 LC-MS。色譜柱清洗和重新平衡耗費(fèi)時(shí)間長從而降低了總體樣品通量。串聯(lián) LC或 LC-MS 的 Vanquish Duo 系統(tǒng)通過以下方式消除了這些限制并提高了分析效率：

? 在不更改驗(yàn)證方法的情況下增加了樣品通量

? 通過盡可能地提高儀器利用率增加了投資回報(bào)

? 通過延伸的色譜柱清洗方法減少了色譜柱殘留量，同時(shí)不影響通量

? 根據(jù)原始梯度方法自動進(jìn)行串聯(lián)方法轉(zhuǎn)換，簡化了雙梯度方法設(shè)置

通過 Vanquish 二元泵 H 模塊的流暢運(yùn)送和正確梯度獲得一致結(jié)果。

高效液相色譜相關(guān)術(shù)語

色譜圖(chromatogram)——樣品流經(jīng)色譜柱和檢測器，所得到的信號-時(shí)間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)。

基線(base line)——經(jīng)流動相沖洗，柱與流動相達(dá)到平衡后，檢測器測出一段時(shí)間的流出曲線。一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。

噪音(noise)——基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過載、檢測器不穩(wěn)定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。

漂移(drift)——基線隨時(shí)間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產(chǎn)生漂移。

可支持三個工作流程。雙梯度流路。同一集成式系統(tǒng)。上海專業(yè)液相色譜系統(tǒng)供應(yīng)商

通過添加可選 Thermo Scientific? Vanquish? 加載裝置，提升至 8832 樣品容量（23 孔板）。新疆專業(yè)高效液相色譜系統(tǒng)廠家直銷

高效液相色譜綜述

HPLC的出現(xiàn)不過三十多年的時(shí)間，但這種分離分析技術(shù)的發(fā)展十分迅猛，應(yīng)用十分***。其儀器結(jié)構(gòu)和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)和流程可用下列方框圖表示(See Fig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。

高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于核酸、肽類、內(nèi)酯、稠環(huán)芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產(chǎn)物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除銹劑的分析等物質(zhì)的分析。

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