共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過(guò)程。組合的一些例子包括多個(gè)質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個(gè)miRNAs進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個(gè)例子是在HEK293細(xì)胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個(gè)質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。肌內(nèi)注射脂質(zhì)體不能引起強(qiáng)烈的毒性反應(yīng)，這與肺內(nèi)或靜脈注射途徑的情況不同。廣西轉(zhuǎn)染試劑公司選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素...

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)**。細(xì)菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過(guò)內(nèi)部DNA修復(fù)過(guò)程促進(jìn)基因編輯。有研究指出，陽(yáng)離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當(dāng)大質(zhì)粒通過(guò)PC傳遞時(shí)，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個(gè)基因組位點(diǎn):血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開(kāi)發(fā)了巨噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cas9表達(dá)質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽(yáng)離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無(wú)法在靶組織和細(xì)胞中進(jìn)行精...

此外，病毒濃度被認(rèn)為是影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的另一個(gè)因素。在Haas等人的評(píng)估中測(cè)試的其他幾個(gè)參數(shù)中，即含有不同輔助蛋白的HIV慢病毒載體構(gòu)建，纖維連接蛋白片段的存在/不存在以及在人臍帶血和胚胎腎細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)培養(yǎng)基中添加多陽(yáng)離子硫酸魚(yú)精蛋白，只有病毒滴度似乎與病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率直接相關(guān)。轉(zhuǎn)染介質(zhì)的條件也可能影響轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。例如，在轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中，使用胎牛血清比牛血清產(chǎn)生更好的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。同樣，研究表明，deae-葡聚糖等多陽(yáng)離子可以比較大限度地減少帶負(fù)電荷細(xì)胞之間的排斥力，并促進(jìn)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)。影響化學(xué)轉(zhuǎn)染效率的因素PLL(聚L -賴氨酸)是生理?xiàng)l件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長(zhǎng)超過(guò)20個(gè)殘基時(shí)，它與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆...

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個(gè)因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門(mén)用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染。哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞由于其有限的壽命和有限的擴(kuò)增能力，通常比其他細(xì)胞類型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細(xì)胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細(xì)胞和AGS。相比之下，據(jù)報(bào)道，基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細(xì)胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)和BM-M...

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過(guò)不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長(zhǎng)。這些結(jié)果來(lái)源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長(zhǎng)抑制似乎是由CpG基序引起的，因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長(zhǎng)的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一...

PHP是由天然來(lái)源的羥基脯氨酸(如膠原蛋白、明膠和其他蛋白質(zhì))制成的，是***個(gè)用作基因載體的聚酯。在生理環(huán)境中，PHP可以在不到兩個(gè)小時(shí)的時(shí)間內(nèi)失去其初始分子量的50%。然而，PHP完全分解為其等效單體需要三個(gè)月的時(shí)間，分解產(chǎn)物是單體羥脯氨酸。雖然PHP酯在溶液中單獨(dú)存在時(shí)降解很快，但與DNA絡(luò)合時(shí)更穩(wěn)定。將PHP酯/pSV-gal復(fù)合物轉(zhuǎn)染CPAE細(xì)胞，測(cè)定PHP酯作為基因傳遞載體的活性。由于聚L-賴氨酸是**常用的基因轉(zhuǎn)運(yùn)聚合物，PHP酯的轉(zhuǎn)染效率與聚L-賴氨酸相當(dāng)。轉(zhuǎn)染效果隨著PHP酯濃度高于DNA濃度而增加。PHP酯轉(zhuǎn)染細(xì)胞的能力不受FBS存在的影響。結(jié)果表明，PHP酯是一種潛在的基...

轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是另一個(gè)可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。Lipofectamine2000試劑與非冷凍對(duì)照相比，至少經(jīng)歷一次凍融循環(huán)后，HEK293、Neuro2α、C2C12成肌細(xì)胞和肌管、hTERTMSC、SMA和HepG2細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染效率更高，且細(xì)胞活力不受影響。一種可能的解釋是，冷凍解凍可以增強(qiáng)分子重排分散，從而允許更高的分散率，從而允許核酸之間很大程度的接觸，形成更多的轉(zhuǎn)染復(fù)合物。然而，還需要更多的研究來(lái)支持這一做法，因?yàn)閮鋈谶^(guò)程也被認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致再結(jié)晶，從而破壞一些化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)。在轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中使用對(duì)照對(duì)于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。鄭州轉(zhuǎn)染試劑價(jià)格PHP是由天然來(lái)源...

基于病毒的轉(zhuǎn)染，或者更具體地稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)，涉及使用病毒載體將特定的核酸序列帶入宿主細(xì)胞。逆轉(zhuǎn)錄病毒，如慢病毒，通常用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。相比之下，腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)和皰疹病毒是不能保證穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的病毒載體。與非病毒轉(zhuǎn)染相比，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)被***認(rèn)為是一種轉(zhuǎn)染難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(如原代細(xì)胞)的高效方法。一般來(lái)說(shuō)，逆轉(zhuǎn)錄病毒只能用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞，而腺病毒、AAV和皰疹病毒可用于轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞。然而，病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)與較高的細(xì)胞毒性相關(guān)，并可能造成病毒***的風(fēng)險(xiǎn)。病毒載體通常包含一個(gè)病毒包膜，它包圍并保護(hù)病毒。表面蛋白可能存在于某些類型的病毒(如腺病毒)的表面，以促進(jìn)與宿主細(xì)胞的接觸和通信。病毒遺傳物質(zhì)被包...

在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過(guò)病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運(yùn)到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動(dòng)子、復(fù)制起點(diǎn)、多個(gè)克隆位點(diǎn)、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個(gè)克隆位點(diǎn)包含獨(dú)特的內(nèi)切酶切割位點(diǎn)，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛?dòng)子(如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會(huì)產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。脂質(zhì)顆粒的加入導(dǎo)致內(nèi)體DNA釋放增加。寧夏PEI 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認(rèn)為是...

PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細(xì)胞毒性越強(qiáng)。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實(shí)現(xiàn)的。然而，一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn)。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙?；?，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán)，可以制備出各種無(wú)毒的分...

人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的比較大挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。2015年，王等報(bào)道了Lipofectamine 2000和XtremeGENE HP等轉(zhuǎn)染試劑在人牙周韌帶干細(xì)胞中的轉(zhuǎn)染效率非常低(<6%)，而陽(yáng)性對(duì)照慢病毒載體的轉(zhuǎn)染效率約為95%。與同一研究中采用的磁輔助轉(zhuǎn)染技術(shù)相比，后者表現(xiàn)出更高的轉(zhuǎn)染效率(～11%)和更低的毒性。在另一項(xiàng)涉及人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(hBM-MSC)的研究中，Lipofectamine LTX被證明比TransIT-2020、Lipofectamine 3000和聚乙烯亞胺(PEI)等其他試劑產(chǎn)生比較好的轉(zhuǎn)染效率(至少高出...

基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問(wèn)題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)、不必要的突變和**。因此，在開(kāi)發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢(shì)在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子脂質(zhì)。從那時(shí)起，大量不同的脂質(zhì)和聚合物被開(kāi)發(fā)出來(lái)。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開(kāi)發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。但似乎找到一種既能改善基因表達(dá)又不影響...

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽(yáng)離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負(fù)電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與?？吭陉?yáng)離子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物，然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段，脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實(shí)的核脂質(zhì)顆粒。復(fù)合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復(fù)合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結(jié)構(gòu)的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復(fù)合物的技術(shù)。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認(rèn)為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復(fù)合物形成。因此，根據(jù)正電荷(陽(yáng)離子脂質(zhì))與負(fù)電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質(zhì)...

PEI的分子量對(duì)細(xì)胞毒性和基因轉(zhuǎn)移活性有影響。由于PEI在細(xì)胞內(nèi)不可降解，所以分子量越高，細(xì)胞毒性越強(qiáng)。此外，具有較高分子量的PEI形成更穩(wěn)定的聚合物，使其更容易轉(zhuǎn)染，但更難在細(xì)胞內(nèi)釋放核酸。另一方面，PEI產(chǎn)生的復(fù)合物分子量降低，更難以轉(zhuǎn)染;但它更容易釋放核酸。因此，確定哪種分子量的PEI更有利是不能隨意實(shí)現(xiàn)的。然而，一些改進(jìn)使PEI在應(yīng)用中更加先進(jìn)。低分子量(LMW) PEI與可生物降解的骨架(如聚谷氨酸衍生物(PEG-b-PBLG))偶聯(lián)，可***降低細(xì)胞毒性并保持較高的轉(zhuǎn)染效率。通過(guò)用丙烯酸乙酯修飾胺，伯胺的乙?；?，或在聚合物結(jié)構(gòu)中引入帶負(fù)電荷的丙酸或琥珀酸基團(tuán)，可以制備出各種無(wú)毒的分...

基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問(wèn)題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)、不必要的突變和**。因此，在開(kāi)發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢(shì)在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉(zhuǎn)染的陽(yáng)離子脂質(zhì)。從那時(shí)起，大量不同的脂質(zhì)和聚合物被開(kāi)發(fā)出來(lái)。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級(jí)脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開(kāi)發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細(xì)胞轉(zhuǎn)...

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無(wú)法深入穿透組織和***，如實(shí)體瘤和大腦。通常情況下，只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛(ài)潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過(guò)劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來(lái)克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后，由于其表面存在細(xì)胞識(shí)別分子，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號(hào)因子的載體，通過(guò)經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個(gè)周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一...

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無(wú)法深入穿透組織和***，如實(shí)體瘤和大腦。通常情況下，只能到達(dá)并轉(zhuǎn)染細(xì)胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛(ài)潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過(guò)劫持**微環(huán)境中的外泌體進(jìn)行細(xì)胞間通訊來(lái)克服這一點(diǎn)。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細(xì)胞外環(huán)境后，由于其表面存在細(xì)胞識(shí)別分子，它們可以與鄰近細(xì)胞融合。外泌體外泌體是細(xì)胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號(hào)因子的載體，通過(guò)經(jīng)歷細(xì)胞內(nèi)化和釋放的幾個(gè)周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞、B細(xì)胞、T細(xì)胞、上皮細(xì)胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理?xiàng)l件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長(zhǎng)超過(guò)20個(gè)殘基時(shí)，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價(jià)附著可通過(guò)受體介導(dǎo)的途徑***增強(qiáng)內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細(xì)胞上表達(dá)。當(dāng)ASOR共價(jià)附著在PLL上時(shí)，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細(xì)胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開(kāi)發(fā)出來(lái)，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細(xì)胞中取得了實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥(niǎo)氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細(xì)胞的過(guò)程。組合的一些例子包括多個(gè)質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個(gè)miRNAs進(jìn)入同一個(gè)細(xì)胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷?xì)胞。其應(yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個(gè)例子是在HEK293細(xì)胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個(gè)質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。上海lipo3000轉(zhuǎn)...

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過(guò)不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長(zhǎng)。這些結(jié)果來(lái)源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長(zhǎng)抑制似乎是由CpG基序引起的，因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長(zhǎng)的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一...

基因***是陽(yáng)離子聚合物作為轉(zhuǎn)染劑的主要應(yīng)用。通過(guò)攜帶質(zhì)粒DNA、mRNA和siRNA，陽(yáng)離子聚合物實(shí)現(xiàn)了與***相關(guān)的功能，如基因增強(qiáng)、基因抑制和基因組編輯?；?****直接、或許也是**簡(jiǎn)單的策略是添加新的蛋白質(zhì)編碼基因。在當(dāng)前**背景下，mRNA疫苗的大規(guī)模使用點(diǎn)燃了人們對(duì)核酸藥物的濃厚興趣。理論上，mRNA能夠表達(dá)任何一種蛋白質(zhì);因此，除了作為疫苗預(yù)防傳染病外，它還可以用于***其他疾病。目前的mRNA傳遞技術(shù)是基于脂質(zhì)納米顆粒平臺(tái)，該技術(shù)的**掌握在少數(shù)幾家公司手中。此外，由脂質(zhì)納米顆粒組成的mRNA疫苗應(yīng)在**溫下儲(chǔ)存和運(yùn)輸，這嚴(yán)重限制了疫苗在高溫或條件有限的地區(qū)的使用。因此，陽(yáng)...

納米顆粒的尺寸很小，但它們比其他顆粒具有更大的粘附表面，同時(shí)具有高穩(wěn)定性。正因?yàn)槿绱?，它們能夠成功地穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞，并與自然發(fā)生的細(xì)胞內(nèi)途徑結(jié)合，具有將特定顆粒帶到預(yù)定目標(biāo)位置的***準(zhǔn)確性。由于納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和保護(hù)化合物方面具有巨大的潛力，可以避免酶的消化或儲(chǔ)存在核內(nèi)體中，因此納米顆粒作為細(xì)胞過(guò)程成像的工具，作為將藥物攜帶到細(xì)胞內(nèi)的各種系統(tǒng)的一部分，或**終用于基因傳遞。納米顆粒通過(guò)官能團(tuán)和非共價(jià)鍵之間的特異性和非特異性鍵與核酸結(jié)合的特性類似于體內(nèi)DNA和抑制蛋白之間的自然結(jié)合。在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸外源DNA的效率受到兩個(gè)主要因素的限制:內(nèi)吞作用，穿過(guò)細(xì)胞膜的方式，或適當(dāng)?shù)募?xì)胞受體***...

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達(dá)相對(duì)短暫。靜脈注射脂叢的肺表達(dá)比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達(dá)量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機(jī)制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對(duì)外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細(xì)胞因子介導(dǎo)的啟動(dòng)子關(guān)閉，(c)通過(guò)凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達(dá)細(xì)胞以及（d）表達(dá)基因的細(xì)胞因細(xì)胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達(dá)減少。這些機(jī)制具有重要意義，因?yàn)椴豢赡苤貜?fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達(dá)會(huì)隨著時(shí)間的推移而減少。盡管通過(guò)中和或消除細(xì)胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達(dá)水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，但肺部沒(méi)有不良反應(yīng)...

由于CRISPR/Cas的發(fā)現(xiàn)，基因組編輯領(lǐng)域經(jīng)歷了一場(chǎng)**。細(xì)菌免疫系統(tǒng)的CRIPSR/Cas成分導(dǎo)致全基因組雙鏈DNA斷裂，并通過(guò)內(nèi)部DNA修復(fù)過(guò)程促進(jìn)基因編輯。有研究指出，陽(yáng)離子聚合物聚乙二胺-環(huán)糊精(PC)有助于編碼Cas9和sgRNA的質(zhì)粒的有效遞送。當(dāng)大質(zhì)粒通過(guò)PC傳遞時(shí)，它們可以以高N/P比聚結(jié)并包裹質(zhì)粒;這有效地編輯了兩個(gè)基因組位點(diǎn):血紅蛋白亞基β(19.1%)和菱形5同源物1(RHBDF1(7.0%))。研究人員開(kāi)發(fā)了巨噬細(xì)胞特異性啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的Cas9表達(dá)質(zhì)粒(pM458和pM330)，并將其包裹在陽(yáng)離子脂質(zhì)輔助PEG-b-PLGA納米顆粒中，以解決無(wú)法在靶組織和細(xì)胞中進(jìn)行精...

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。雖然有幾項(xiàng)研究已經(jīng)調(diào)查了血液成分如何使脂質(zhì)和聚合物納米顆粒不穩(wěn)定，對(duì)于介導(dǎo)細(xì)胞中基因傳遞或沉默的傳遞系統(tǒng)的**終組成知之甚少。多叢和脂叢的組成在系統(tǒng)給藥進(jìn)入血液后會(huì)發(fā)生不斷的變化。過(guò)多的聚合物鏈或脂質(zhì)體成分不強(qiáng)烈附著于復(fù)合物將從顆粒中脫落，而新的成分，如脂蛋白，可以粘附在復(fù)合物的表面。這不僅會(huì)導(dǎo)致顆粒的不穩(wěn)定，還會(huì)改變生物分布或促進(jìn)體內(nèi)***。了解在體內(nèi)遞送的每個(gè)階段(在給藥部位，在血液循環(huán)過(guò)程中，在***和組織的細(xì)胞外基質(zhì)中，以及**終進(jìn)入靶細(xì)胞時(shí))，多聚物和脂聚物的組成如何變化，可能有助于...

隨著寡核苷酸生物合成產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，不同類型的修飾寡核苷酸也被引入市場(chǎng)，以提高小RNA寡核苷酸轉(zhuǎn)染的效率。其中一種是通過(guò)化學(xué)修飾來(lái)提高其與靶標(biāo)和阻斷外切酶活性的結(jié)合親和力的agomirs和antagomirs。agomir是一種人工修飾的雙鏈miRNA模擬物，旨在發(fā)揮比傳統(tǒng)miRNA模擬物更高的靶標(biāo)抑制活性(krtzfeldt另一方面，antagomir是一種專門(mén)設(shè)計(jì)的單鏈miRNA類似物，旨在抑制特定的miRNA。agomir和antagomir都被認(rèn)為更穩(wěn)定、更有效、更特異，而且與正常的模擬物或拮抗劑相比，對(duì)宿主細(xì)胞膜具有更高的結(jié)合親和力。鎖定核酸(LNA)是另一種修飾的寡核苷酸，其至少一個(gè)核...

在大腸桿菌細(xì)胞中復(fù)制的質(zhì)粒通常含有二核苷酸頻率為1:16的CpG基序，這與細(xì)菌DNA中的頻率相似。CpG免疫刺激的兩個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域是疫苗接種和腫瘤免疫***。許多出版物表明，免疫刺激CpG基序可以用于疫苗接種策略，包括給藥編碼抗原的pDNA載體或給藥抗原本身。通過(guò)不同的給藥途徑給藥含CpG的脂叢可以抑制**生長(zhǎng)。這些結(jié)果來(lái)源于使用表達(dá)促炎細(xì)胞因子(如IL-12)的轉(zhuǎn)基因或甚至不含外源轉(zhuǎn)基因的載體的研究。**的生長(zhǎng)抑制似乎是由CpG基序引起的，因?yàn)檫@些序列的甲基化否定了這種作用。雖然有***效果，但含CpG基序?qū)?*生長(zhǎng)的抑制的確切性質(zhì)尚不清楚。產(chǎn)生的細(xì)胞因子對(duì)腫瘤細(xì)胞和**脈管系統(tǒng)都有多重作用。一...

Severinoetal.進(jìn)行的研究也指出了陽(yáng)離子脂質(zhì)作為基因遞送納米載體的潛在毒性。他們成功實(shí)現(xiàn)了人動(dòng)力蛋白的表達(dá)，但也證明了較高濃度的SLN仍然具有細(xì)胞毒性，并導(dǎo)致活細(xì)胞數(shù)量減少。另一組比較了DNA/DOTAP復(fù)合物和由魚(yú)精蛋白、DNA和脂質(zhì)層組成的納米顆粒在不同細(xì)胞系上的轉(zhuǎn)染效率:CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞)、HEK293(人胚胎腎細(xì)胞)、NIH3T3(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)和A17(小鼠*細(xì)胞)。魚(yú)精蛋白/DNA/脂質(zhì)納米顆粒在每種細(xì)胞系中更有效地實(shí)現(xiàn)綠色和紅色熒光蛋白的表達(dá)，即使不同細(xì)胞系對(duì)轉(zhuǎn)染的敏感性不同。陽(yáng)離子脂質(zhì)的毒性作用使我們必須尋找另一種能夠取代它們的化合物。不同的β-氨基酯聚...

PLL(聚L -賴氨酸)是生理?xiàng)l件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長(zhǎng)超過(guò)20個(gè)殘基時(shí)，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價(jià)附著可通過(guò)受體介導(dǎo)的途徑***增強(qiáng)內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細(xì)胞上表達(dá)。當(dāng)ASOR共價(jià)附著在PLL上時(shí)，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細(xì)胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開(kāi)發(fā)出來(lái)，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細(xì)胞中取得了實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥(niǎo)氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更...

**近一項(xiàng)與抗血管生成基因傳遞高度相關(guān)的發(fā)現(xiàn)是，陽(yáng)離子脂質(zhì)體（CLs）選擇性地靶向**的血管系統(tǒng)。陰離子或電中性脂質(zhì)體沒(méi)有發(fā)現(xiàn)這種作用。Campbell和他的同事[95]發(fā)現(xiàn)，與電中性脂質(zhì)體相比，使用CLs在**血管內(nèi)皮細(xì)胞(VECs)中積累更多，CLs通過(guò)添加5mol%聚乙二醇來(lái)穩(wěn)定。在兩種人類**類型(LS174T和MCAIV)和兩個(gè)位置(顱窗和背側(cè)皮膚褶腔)中發(fā)現(xiàn)了**VECs的選擇性遞送。**血管中囊泡的分布是不均勻的，這可能與該技術(shù)是否足以根除足夠數(shù)量的**VECs以實(shí)現(xiàn)**消退反應(yīng)有關(guān)。有趣的是，注射后24小時(shí)，脂質(zhì)體上50%的摩爾電荷***增加了小鼠肺部的積聚。選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑...