杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

來源： 發(fā)布時間：2024-06-04

免疫沉淀純化所得抗原純度低一般有多種原因：
1. 非特異性蛋白污染
如果洗脫所得抗原純度較低，則有幾種方法可以進行優(yōu)化。在結(jié)合或洗滌緩沖液中加入去污劑或其他可以降低非特異性結(jié)合的組分。使用普通微珠預(yù)純化樣本還可以降低非目標分子的共純化。此外，還可以使用無關(guān)蛋白 (如BSA) 封閉微珠 。
2. 抗體污染
使用蛋白A、G或A/G的經(jīng)典免疫沉淀實驗中會出現(xiàn)抗體與抗原共洗脫的情況。如果共洗脫會影響下游分析，則需要使用抗體通過共價連接固定至微珠的方法進行實驗，如Pierce 直接 IP 或交聯(lián) IP 的形式。
免疫沉淀抗體的選擇？杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

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免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質(zhì)相互作用和純化特定蛋白質(zhì)的實驗方法。
優(yōu)點:
1. 特異性強：利用特異性抗體捕獲目標蛋白，可以有效地從復(fù)雜的生物樣本中分離出感興趣的蛋白質(zhì)。
2. 靈敏度高：可以檢測到低豐度的蛋白質(zhì)，包括瞬態(tài)或弱相互作用的蛋白質(zhì)復(fù)合物。
3. 應(yīng)用范圍廣：適用于多種生物樣本，如細胞裂解物、組織提取物和生物流體。
4. 生物學(xué)洞察深入：能夠揭示蛋白質(zhì)之間的相互作用網(wǎng)絡(luò)，有助于理解細胞內(nèi)的信號傳遞和調(diào)控機制。
5. 可與其他技術(shù)聯(lián)用：如與質(zhì)譜（IP-MS）聯(lián)用，可以準確鑒定蛋白質(zhì)及其相互作用伙伴。
缺點:
1. 對抗體依賴性高：需要高親和力和高特異性的抗體，抗體的質(zhì)量直接影響實驗結(jié)果。
2. 可能存在非特異性結(jié)合：樣本中的其他蛋白質(zhì)可能與抗體或固相支持物發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致背景噪音。
3. 可能影響蛋白質(zhì)的天然狀態(tài)：裂解和沉淀過程可能會改變蛋白質(zhì)的構(gòu)象和功能。
4. 實驗重復(fù)性：需要多次實驗來確保結(jié)果的可重復(fù)性和可靠性。
5. 樣品處理：需要避免樣品降解和非特異性結(jié)合，這可能需要使用蛋白酶抑制劑和適當?shù)木彌_液條件。
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免疫沉淀技術(shù)RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）是一種用于研究細胞內(nèi)RNA與蛋白質(zhì)相互作用的技術(shù)。RIP技術(shù)可以幫助我們了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的動態(tài)過程，并發(fā)現(xiàn)miRNA等非編碼RNA的調(diào)節(jié)靶點。
RIP技術(shù)的原理是利用針對特定RNA結(jié)合蛋白的抗體，將細胞內(nèi)的RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物沉淀下來。然后，可以通過分離純化，對這些復(fù)合物中的RNA進行檢測，如qPCR驗證或測序分析。
表觀遺傳學(xué)和RNA生物學(xué)領(lǐng)域?qū)Σ煌琑NA作用和功能的關(guān)注增加。RNA-蛋白質(zhì)相互作用能夠調(diào)控mRNA和非編碼RNA的功能。對RNA潛能的這一新認識帶動了新方法的發(fā)展，使研究人員能夠定位 RNA-蛋白質(zhì)相互作用。

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡稱IP）是一種生物化學(xué)方法，它利用特異性抗體對抗原進行親和純化。在含有目的抗原的細胞裂解液中加入特定的抗體以及Protein A/G-Beads（預(yù)先將Protein A/G固定結(jié)合在磁珠上），根據(jù)抗原與抗體、Protein A/G與抗體的Fc的特異性，形成“抗原-抗體-Protein A/G-Beads”復(fù)合物，清洗離心后去除溶液中未結(jié)合的雜蛋白，檢測是否存在目的蛋白。
免疫沉淀技術(shù)常用于從細胞或組織裂解物中分離用于免疫印跡檢測或其他檢測技術(shù)的蛋白和其他生物分子。它的目標是分離足夠用于Western Blot或其他檢測方法檢測的蛋白質(zhì)。
免疫沉淀技術(shù)ChIP的實驗方法。

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免疫沉淀是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法?？贵w與細胞裂解液或表達上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的珠子（agarose或Sepharose）孵育，通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。免疫沉淀是一種生物學(xué)技術(shù)，它利用抗體的特異性結(jié)合特性來富集和分離混合物中的特定蛋白質(zhì)。這種技術(shù)是研究蛋白質(zhì)表達、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)修飾和蛋白質(zhì)功能的強大工具。免疫沉淀技術(shù)ChIP的應(yīng)用有哪些？深圳ChIP免疫沉淀磁珠價格

免疫沉淀技術(shù)的優(yōu)缺點？杭州Protein AG免疫沉淀實驗視頻

免疫沉淀技術(shù)（Immunoprecipitation，簡稱IP）是一種生物學(xué)實驗方法，用于從細胞或組織裂解物中分離和純化特定蛋白質(zhì)。這項技術(shù)依賴于抗體的高度特異性，通過抗體與目標蛋白質(zhì)的結(jié)合，實現(xiàn)對目標蛋白質(zhì)的富集和純化。
具體操作步驟通常包括以下幾個階段：裂解細胞或組織，抗體與蛋白質(zhì)結(jié)合，固相支持物的使用，免疫復(fù)合物的捕獲，洗滌，洗脫分析。
免疫沉淀技術(shù)不僅可以用于檢測蛋白質(zhì)的存在和量，還可以用于研究蛋白質(zhì)的翻譯后修飾、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及蛋白質(zhì)的功能等。此外，免疫沉淀技術(shù)是許多其他高級實驗技術(shù)的基礎(chǔ)，如染色質(zhì)免疫沉淀測序（ChIP-Seq）和蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)分析等。
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