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原代細胞和傳代細胞培養(yǎng)有什么區(qū)別：一、定義不同：1、原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細胞進行的開始培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)。2、傳代培養(yǎng)是指需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，重新接種到另外的培養(yǎng)器皿（瓶）內(nèi)，再進行培養(yǎng)的過程。對單層培養(yǎng)而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。二、特點不同：1、原代細胞培養(yǎng)與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上相似性大。由于培養(yǎng)的細胞剛剛從組織分離出來，故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。2、當原代培養(yǎng)成功以后，隨著培養(yǎng)時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發(fā)生接觸性克制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養(yǎng)物不足和代謝物積累而不利于生長或發(fā)生中毒。能夠進行懸浮培養(yǎng)的細胞，其生命力一般都比較旺盛。長沙正規(guī)原代細胞分離試劑盒進貨價

原代細胞的培養(yǎng)和維持：1. 消化培養(yǎng)法2.懸浮細胞培養(yǎng)法對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。3.部位培養(yǎng)部位培養(yǎng)是指從供體取得部位或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，部位培養(yǎng)可保持部位組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。蘇州原代細胞分離試劑盒直銷廠家如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小。

原代細胞培養(yǎng)注意事項：1.收到細胞時，要鏡下觀察是否有污染情況；收到細胞的前幾天，要做好各種倍數(shù)的鏡下拍照記錄，以防細胞出現(xiàn)問題后，可以跟公司很好地溝通。2.收到細胞后，不要馬上處理。應(yīng)置于培養(yǎng)箱中靜置4h以上再操作。如果不著急，可靜置過夜。3.細胞的靠前次傳代，一定要密度高一些傳代，原代細胞傳代密度低，很難長起來。建議1:2-1:3傳代。4.原代細胞傳代時（內(nèi)皮細胞，貼壁為例），0.25%+0.53nM的胰酶消化，1ml消化液37度培養(yǎng)箱內(nèi)消化30sec，再加入5ml培養(yǎng)基（正常消化貼壁細胞，我們使用胰酶和培養(yǎng)基的量是1:1，但是原代細胞必須用大量培養(yǎng)基中和胰酶）。5.原代細胞不建議凍存，因為凍存很容易復(fù)活不成功。如果要凍存的話，建議在P2或P3代凍存，凍存液中的血清越多越好，建議比例9（血清）:1（DMSO）。6.原代細胞復(fù)蘇時，置于37-38度水浴融化細胞，并加入10ml培養(yǎng)液（正常貼壁細胞復(fù)蘇時，也可以使用這種比例，復(fù)蘇成活率會較大提高），離心重懸鋪板

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞達到95%以上的純度，這樣得到的實驗數(shù)據(jù)更為準確要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。

原代細胞的培養(yǎng)是指直接從機體取下細胞、組織和部位后立即進行培養(yǎng)。因此，較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細胞保持原有細胞的基本性質(zhì)，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數(shù)。原代細胞在培養(yǎng)的過程中，也可能產(chǎn)生基因突變而形成無限傳代的細胞株，傳代次數(shù)越多，就越有可能變成細胞株（基因缺陷型），因此科學界也通常把靠前代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。較常用的原代細胞的培養(yǎng)有組織塊培養(yǎng)和分散細胞培養(yǎng)。組織塊培養(yǎng)是將剪碎的組織塊直接移植在培養(yǎng)瓶壁上，加入培養(yǎng)基后進行培養(yǎng)它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。溫州濟南原代細胞分離試劑盒

并且培養(yǎng)基中需包含細胞類型特定的營養(yǎng)因子、生長因子、葡萄糖和/或物品。長沙正規(guī)原代細胞分離試劑盒進貨價

原代細胞培養(yǎng)實驗室常規(guī)步驟為：1）將動物組織從機體中取出并消毒除去存留在組織上的細菌、細菌、等污染源，這些污染源將會所需培養(yǎng)的原代細胞凋亡、停止生長和繁殖直至死亡，因此整個原代細胞培養(yǎng)過程中較全在無菌狀態(tài)下進行。2）將組織塊在選定的蛋白酶溶液中浸泡20-30分鐘，通常在37C水浴里進行，而蛋白酶的選定取決于部位組織和所需細胞的類型，比如成骨、肌肉、心、肝等就需要用胰蛋白酶才能解而出單個細胞，但是對于腦組織和乳腺等軟組織，就只能用分解能力較弱的膠原蛋白酶，以免損傷分散出來的單個細胞。3）將分散而成的單個細胞置于合適的培養(yǎng)基（含有特殊細胞生長因子、添加劑以及血清，或者無血清培養(yǎng)基）中培養(yǎng)，使細胞得以生存、生長和繁殖，整個過程都是在無菌情況下操作長沙正規(guī)原代細胞分離試劑盒進貨價