合肥鼠尾膠原

鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料及其制備方法。各個材料及其重量配比為鼠尾膠原蛋白∶聚乙烯醇∶殼聚糖為余量為水，采用冷凍干燥工藝制備。本發(fā)明所制備的止血材料主要采用鼠尾膠原蛋白制備，較傳統(tǒng)的止血材料不可吸收、容易引起機體過敏、止血效果差等缺點，本發(fā)明所制備的止血材料具有人體內(nèi)可吸收，生物相容性好；止血效果快，具有很強的親水性；同時可啟動血小板的凝聚，一旦血小板凝聚，就可形成血栓，進而促使血漿結(jié)塊阻止血流。同時，膠原表面的特定區(qū)域可以與細胞表面存在的類似纖連蛋白的糖蛋白結(jié)合，可以起到防止腸粘連的功效。鼠尾膠原對前庭毛細胞具有良好的貼壁黏附促進作用。合肥鼠尾膠原

實驗應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細胞，細胞角蛋白18表達陽性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實所培養(yǎng)的細胞具有典型的分泌上皮細胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細胞的方法，并且制作簡便,成本低廉。南昌鼠尾膠原供應(yīng)商鼠尾膠原醋酸溶解：不建議用過濾的方法無菌化。

鼠尾膠原蛋白I型在濃度1mg/ml以上，pH7左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中，在成膠過程中需要加入0.06X體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預(yù)冷):10xPBS(可含10mg/L的酚紅用于pH指示)或10x培養(yǎng)液,0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水不含細胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul生友鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過來把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul10xPBS或10x培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅，初次使用時需要用pH試紙測試)。

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄，并且制作簡便，成本低廉。整個操作請在無菌環(huán)境下無菌操作，避免污染以影響細胞生長。

鼠尾膠原實驗應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞，培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻，平均厚度約為1mm；HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開；掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形，纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接；同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的；同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立，為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。鼠尾膠原醋酸溶解：在無菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。寧波鼠尾膠原直銷價

將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。合肥鼠尾膠原

鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式,為人鼻腔黏液纖毛運輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法。方法制備鼠尾膠原并鋪片,以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細胞,培養(yǎng)7天時進行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu),應(yīng)用高速攝像技術(shù)測量纖毛擺動頻率。結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻,平均厚度約為1mm;HE染色可見上皮細胞呈單層向周圍爬開;掃描電鏡下見纖毛上皮細胞呈不規(guī)則多角形,纖毛周圍可見微絨毛;透射電鏡下可見纖毛上皮細胞間為緊密連接;同一細胞任意兩點纖毛擺動頻率是相同的;同一來源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動頻率是相同的。結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立,為今后研究鼻內(nèi)用藥對纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。合肥鼠尾膠原