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GUS染色步驟:1.將準(zhǔn)備好的材料浸泡在GUS染色液中,于25-37℃保溫1小時(shí)至過(guò)夜。2.葉片等綠色材料轉(zhuǎn)入70%乙醇中脫色2-3次,至陰性對(duì)照材料呈白色。3.肉眼或顯微鏡下觀察,白色背景上的藍(lán)色小點(diǎn)即為GUS表達(dá)位點(diǎn)。注:用于染色的植物材料的制備方法要因涉及的特定組織和部位的不同而異。例如,擬南芥的根、花和葉片以及幼苗的根就可以不作任何預(yù)處理而直接染色。但是像和馬鈴薯這些植物的莖和葉就必須在染色前切成薄片(1-3mm)。當(dāng)操作大的組織和樣品時(shí),可以選用真空滲入法來(lái)幫助底物和酶滲入細(xì)胞。多糖主要指糖原,它是一種膠樣液態(tài)存在于肝細(xì)胞、骨骼肌、心肌等處。江蘇哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒廠家批發(fā)價(jià)
糖原染色:細(xì)胞內(nèi)含1,2-乙二醇基的多糖類經(jīng)過(guò)碘酸氧化后產(chǎn)生醛基,與特殊染液作用,使無(wú)色品紅變成紅色化合物,沉淀于胞質(zhì)之中。紅色的深淺與細(xì)胞中起反應(yīng)的1,2-乙二醇基的量呈正比。用于不典型巨核細(xì)胞與李—斯細(xì)胞的鑒別,前者PAS反應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性,后者為陰性或弱陽(yáng)性;用于高雪細(xì)胞和尼曼一匹克細(xì)胞的鑒別,前者PAS反應(yīng)為強(qiáng)陽(yáng)性,而后者反應(yīng)為陰性或弱性。正常值正常情況下,紅細(xì)胞系統(tǒng)的原、幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞;粒細(xì)胞系統(tǒng)的原粒細(xì)胞、原單核細(xì)胞和大多數(shù)淋巴細(xì)胞為陰性反應(yīng)。自早幼粒階段以后的粒細(xì)胞和幼單核細(xì)胞可呈弱陽(yáng)性反應(yīng)。天津如何使用糖原染色試劑盒量大從優(yōu)過(guò)碘酸氧化時(shí)間不宜過(guò)久,氧化時(shí)的溫度以18~22℃佳。
糖原染色(PAS):(1)原理:過(guò)碘酸將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化,生成醛基。醛基與雪夫液中的無(wú)色品紅結(jié)合,形成紫色化合物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。(2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,流水沖洗,晾干。滴加過(guò)碘酸溶液作用20分鐘,流水沖洗,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。(4)臨床意義:根據(jù)染色陽(yáng)性程度和陽(yáng)性物形態(tài)鑒別主要用于急性淋巴細(xì)胞白血病和急性非淋巴細(xì)胞白血病鑒別,還有助于紅白血病與巨幼細(xì)胞貧血和溶血性貧血的鑒別診斷
試劑盒:JC-1是一種陽(yáng)離子脂質(zhì)熒光染料,可作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-10染料是JC-1染料的升級(jí),有著更很好的水溶性以及染料穩(wěn)定性。原理:JC-1染料在正常細(xì)胞內(nèi)聚集在線粒體內(nèi),形成多聚體,發(fā)紅色熒光;而在凋亡細(xì)胞內(nèi),由于線粒體膜電位的破壞,不能聚集到線粒體內(nèi),以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài),在低濃度時(shí)以單體的形式存在,高濃度時(shí)以多聚體形式存在,兩者的發(fā)射光譜不同,但均可在流式細(xì)胞儀綠色(FL-1)通道檢測(cè)出綠色熒光,JC-1可透過(guò)正常細(xì)胞膜以單體狀態(tài)聚集胞內(nèi)。切片脫蠟應(yīng)盡量干凈,否則影響染色效果。
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一,McManus在1946年較先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白,該法常用來(lái)顯示糖原和其他多糖,該染色試劑盒不僅能夠顯示糖原,還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)以及軟骨、垂體、霉菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。過(guò)碘酸(又稱高碘酸)是一種強(qiáng)氧化劑,它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1,2-乙二醇基,使之變?yōu)槎?,醛不Schiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物,產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細(xì)胞內(nèi)其他物質(zhì),使用時(shí)應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時(shí)間,使氧化控制在既能把乙二醇基氧化成醛基又不至于過(guò)氧化,這是很關(guān)鍵的步驟。PAS技術(shù)是很少可檢測(cè)不同種類的黏液物質(zhì)(如糖原、黏蛋白和糖蛋白)的方法,但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要冸確鑒別黏液物質(zhì)(如黏蛋白或糖原),需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情冴下可用α–淀粉酶或麥芽淀粉酶來(lái)催化糖原的糖苷鍵水解,形成水溶性的雙糖-麥芽糖,在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認(rèn)為是消化糖原的一種有效手段,但是出于安全以及缺乏標(biāo)冸唾液的考慮,不主張應(yīng)用唾液。生物膜與細(xì)胞器的研究。江蘇哪家提供糖原染色試劑盒廠家供應(yīng)
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糖原及粘液染色法:操作方法:(1)石蠟切片脫蠟至水。(2)0.5%過(guò)碘酸水溶液5分鐘。或1%過(guò)碘酸95%酒精溶液(過(guò)碘酸再結(jié)晶應(yīng)重新配制使用)。(3)蒸餾水洗,70%酒精洗。(4)Schiff氏液15-30分鐘。(Schiff氏液從冰箱取出升至室溫使用)(5)流水沖洗10分鐘。(6)蘇木素浸染細(xì)胞核2-3分鐘。(7)脫水、透明、封蓋。結(jié)果:糖原呈紅色,細(xì)胞核呈藍(lán)色。試劑配制:(1)0.5%過(guò)碘酸(HIO4)水溶液或70%酒精溶液。(2)Schiff氏試劑。堿性品紅1g蒸餾水200ml1N鹽酸(98.3ml比重1.16鹽酸,加入蒸餾水成1000ml)20ml偏重亞硫酸鈉或鉀1g堿性品紅1g加入200ml蒸餾水,攪拌加熱沸騰,待冷卻至50℃過(guò)濾,加入當(dāng)量鹽酸至25℃時(shí)加入偏重亞硫酸鈉。置于暗處,兩天后溶液變桔黃色或草黃色,然后加入少量活性碳并震蕩、過(guò)濾,此時(shí)溶液應(yīng)為無(wú)色。保存冰箱備用。溶液如顯淺紅色或草黃色,染色效果較差江蘇哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒廠家批發(fā)價(jià)