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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-08-16

在這項(xiàng)新的研究中,經(jīng)過(guò)基因修飾的外泌體(被稱作iExosome)能夠運(yùn)送特異性地靶向KRAS突變基因的小RNA分子,從而導(dǎo)致胰腺病模式小鼠病情緩解,增加它們的總存活率。這些研究人員采用了一種被稱作RNA干擾(RNAi)的靶向方法:利用這些天然的納米顆粒(即外泌體)運(yùn)送小干擾RNA(siRNA)或短發(fā)夾RNA(shRNA)分子來(lái)靶向胰腺病細(xì)胞中的KRAS突變基因,從而影響多種胰腺病模型的一些病癥負(fù)荷和存活。他們證實(shí)外泌體能夠作為一種高效的RNAi載體發(fā)揮作用,這是因?yàn)檫@些納米大小的囊泡(即外泌體)輕松地在體內(nèi)遷移和進(jìn)入靶細(xì)胞(包括病細(xì)胞)中。由于外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。珠海外泌體提取試劑哪里買

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研究初次發(fā)現(xiàn)瘧原蟲傳染小鼠血漿外泌體(exosomes)能夠壓制一些病癥血管生成,并初步闡明其分子機(jī)制。研究加深了對(duì)瘧原蟲傳染宿主所分泌的外泌體與一些病癥血管生成之間的相互作用的認(rèn)識(shí),為開發(fā)瘧原蟲傳染來(lái)源的外泌體作為一種新型抗一些病癥制劑奠定了基礎(chǔ)。研究人員選用肺病小鼠模型作為研究對(duì)象,從傳染瘧原蟲的小鼠血漿中獲得外泌體,并將這些外泌體注射到小鼠的一些病癥內(nèi)部,并與沒(méi)有瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體進(jìn)行對(duì)照。研究發(fā)現(xiàn),瘧原蟲傳染小鼠的血漿外泌體明顯壓制一些病癥血管的生成。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),瘧原蟲傳染的小鼠血漿外泌體通過(guò)至少四種特殊的微小RNA(miR16-5p/17-5p/322-5p/497-5p)壓制血管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF受體(VEGFR2)的表達(dá)從而阻斷血管生成的信號(hào)通路。這些發(fā)現(xiàn)加深了人們對(duì)瘧原蟲抗病機(jī)理的理解,并為瘧原蟲療法治病一些疾病的臨床研究提供進(jìn)一步的理論依據(jù)。廣州外泌體提取試劑廠家現(xiàn)貨外泌體的特殊結(jié)構(gòu)和功能,使得它具有潛在的應(yīng)用價(jià)值,可以作為診斷多種疾病的生物指標(biāo)。

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外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒(méi)有非常統(tǒng)一的鑒定標(biāo)準(zhǔn),也有一些研究認(rèn)為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過(guò)濾離心,這種操作簡(jiǎn)單、省時(shí),不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問(wèn)題。三是密度梯度離心法,用此種方法分離到的外泌體純度高,但是前期準(zhǔn)備工作繁雜,耗時(shí),量少。外泌體檢測(cè)作為一種新型的液體活檢熱點(diǎn)技術(shù)已被許多臨床科研機(jī)構(gòu)普遍地應(yīng)用于一些病癥和疾病的無(wú)創(chuàng)診斷

外泌體的提取方法:1.超速離心法(差速離心)。超離法是較常用的外泌體純化手段,采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行,可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單,獲得的囊泡數(shù)量較多而廣受歡迎,但過(guò)程比較費(fèi)時(shí),且回收率不穩(wěn)定(可能與轉(zhuǎn)子類型有關(guān)),純度也受到質(zhì)疑;此外,重復(fù)離心操作還有可能對(duì)囊泡造成損害,從而降低其質(zhì)量。2.密度梯度離心。在超速離心力作用下,使蔗糖溶液形成從低到高連續(xù)分布的密度階層,是一種區(qū)帶分離法。通過(guò)密度梯度離心,樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣,耗時(shí),對(duì)離心時(shí)間極為敏感。靜置10~15分鐘,留取沉淀物備用。

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人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而啟動(dòng)靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體提純?cè)噭┖械奶厣c優(yōu)勢(shì):無(wú)需沉淀試劑,也無(wú)需過(guò)夜培養(yǎng)。昆明正規(guī)外泌體提取試劑供應(yīng)商

外泌體的提取分離:密度梯度離心。珠海外泌體提取試劑哪里買

外泌體提取:1、過(guò)濾。超濾膜也可用于分離外泌體。根據(jù)外泌體的大小,從蛋白質(zhì)和其他大分子中分離外泌體。較常見的過(guò)濾膜具有0.8μm、0.45μm或0.22μm的孔徑,可用于收集大于800nm、400nm或200nm的外泌體,也有設(shè)計(jì)成微柱多孔硅纖毛結(jié)構(gòu)以分離40-100nm外泌體:不過(guò),該方法由于過(guò)濾膜的粘附,可能會(huì)損失外泌體,并且過(guò)濾時(shí)的壓力和剪切力,可能會(huì)使外泌體變形受損。2、基于聚合物的沉淀技術(shù)。基于聚合物的沉淀技術(shù)通常包括將樣本與含聚合物的沉淀溶液混合,在4℃溫育并低速離心。用于聚合物沉淀的較常見聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。用這種聚合物沉淀具有許多優(yōu)點(diǎn),包括對(duì)分離的外泌體影響小、pH中性等。目前大多數(shù)快速分離外泌體的商品化試劑盒都是基于此方法。然而基于聚合物的沉淀方法可能會(huì)同時(shí)分離非囊泡污染物(包括脂蛋白)而且,聚合物材料的混雜可能會(huì)影響下游分析珠海外泌體提取試劑哪里買

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