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鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基和一種天然的黏附劑,可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng);也可用于制備三維膠原凝膠,使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。制備鼠尾膠原方法:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復(fù)步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克);6、將尾腱置于平皿內(nèi)剪碎,轉(zhuǎn)移至三角燒瓶中;7、按每克尾腱50ml的比例,加入0.1%醋酸溶液;8、搖晃,使尾腱分散于醋酸溶液中,4℃放置一星期;9、離心,4000轉(zhuǎn)/分,10-15分鐘;10、吸取上清,分裝成小瓶,4℃保存。使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。南京正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明:含細(xì)胞的三維膠原的制備(以配制1毫升,1mg/ml三維膠為例):準(zhǔn)備好懸浮于培養(yǎng)液的細(xì)胞,并放置于冰浴中。將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到12ul0.1mol/LNaOH中(如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入23ul10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放置20分鐘待膠凝固后,加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。南京正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng):三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時(shí)可形成具有一定強(qiáng)度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過(guò)程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來(lái)中和。需要的溶液(均需要無(wú)菌、預(yù)冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié))立即混勻。再加入100ul10PBS10培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅,初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄,并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。
鼠尾Ⅰ型膠原:材料與方法:1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司);多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈,用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開(kāi),去掉皮毛,并剪成小段,抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中,用無(wú)菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液,將肌鍵置于平皿中剪碎,按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃,將肌鍵分散于醋酸溶液中,4℃放置一周,然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下,肌腱水解成膠凍狀凝膠,置于冰箱4℃保存。一種基于鼠尾膠原蛋白:根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血材料。
膠原蛋白的功效:1.膠原蛋白可以作為一種補(bǔ)鈣食品,膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運(yùn)輸鈣到骨細(xì)胞的運(yùn)載工具,骨細(xì)胞中的骨膠原是羥基磷灰石的粘合劑,它與羥基磷灰石共同構(gòu)成了骨骼的主體。因此,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機(jī)體鈣質(zhì)的攝入量,膠原蛋白可制成補(bǔ)鈣的保健食品。2.膠原蛋白在人體運(yùn)動(dòng)鍛煉的過(guò)程中,可以促使身體消耗大量脂肪達(dá)到的效果。但需要注意的是膠原蛋白本身是沒(méi)有作用的,它只能在運(yùn)動(dòng)呢鍛煉是增加脂肪的消耗量。3.膠原蛋白是身體免疫作用中負(fù)責(zé)重要功能的阿米巴細(xì)胞清掃異物的感知器,因此對(duì)預(yù)防疾病很有幫助??商岣呙庖邫C(jī)能、克制細(xì)胞、活化細(xì)胞機(jī)能、活化筋骨、治好關(guān)節(jié)炎及酸痛。鼠尾膠原蛋白是從老鼠尾巴提取出來(lái)的物質(zhì)。重慶鼠尾膠原
制備鼠尾膠原:將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡。南京正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格
鼠尾膠原蛋白等實(shí)驗(yàn)技術(shù)應(yīng)用:干細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等多種「難伺候」的細(xì)胞,以及一些組織在體外培養(yǎng)時(shí),需要在模擬體內(nèi)環(huán)境的細(xì)胞外基質(zhì)中生長(zhǎng),膠原蛋白和纖粘蛋白正是細(xì)胞外基質(zhì)的主要組成部分,富含1型膠原蛋白大鼠尾部也成了實(shí)驗(yàn)室用膠原蛋白的較主要來(lái)源。鼠尾取血剪下幾毫米小鼠尾巴、在小鼠尾靜脈上劃一道小口、用注射器抽取的操作都可以得到這種鮮紅的。它可以用于監(jiān)測(cè)小鼠血液成分的變化,確認(rèn)小鼠是否患上了糖尿病或者某些治好能夠改變小鼠的血糖等。比起心臟和眼部取血,實(shí)驗(yàn)用鼠尾尖取血的取血量較小,但取血之后,小鼠還能繼續(xù)下一步建?;蛘邔?shí)驗(yàn),完全沒(méi)有性命之憂。南京正規(guī)鼠尾膠原價(jià)格
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