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糖原染色法:染色原理細胞胞漿中存在糖原或多糖類物質(zhì)(如糖蛋白、粘多糖、糖脂、粘蛋白等),過碘酸能使細胞內(nèi)的多糖乙二醇基氧化為二醛基,其與Schiff試劑中的無色品紅結合后呈現(xiàn)紫紅色,沉積在細胞內(nèi)多糖所在之處。染色步驟:1.組織石蠟包埋切片后脫蠟至水,蒸餾水洗2min(細胞爬片4%多聚甲醛固定后水洗);2.滴加過碘酸溶液,氧化5min;3.蒸餾水洗10min;4.滴加Schiff試劑,侵染10-20min;5.傾去Schiff試劑,流水沖洗10min;6.滴加蘇木素染色液,染核1-2min;7.流水沖洗5min;8.酸性乙醇分化液分化。加入少量活性碳并震蕩、過濾,此時溶液應為無色。浙江咨詢糖原染色試劑盒產(chǎn)品介紹
糖原pas染色液配制及使用方法:1、常規(guī)固定,常采用10%的福爾馬林,常規(guī)脫水包埋。2、石蠟切片脫蠟入蒸餾水;冰凍切片直接入蒸餾水。3、自來水沖洗2~3min,再用蒸餾水浸洗2次。4、入過碘酸溶液,室溫放置,一般不宜超過10min。5、自來水沖洗1次,再用蒸餾水浸洗2次。6、入SchiffReagent,置于室溫陰暗處浸染。7、自來水沖洗10min。8、入蘇木素染色液,染細胞核。9、酸性乙醇分化液分化。_x005f_x000c_10、自來水沖洗10~15min,更換蒸餾水清洗,使其返藍。11、逐級常規(guī)乙醇脫水。二甲苯透明,中性樹膠封固。浙江哪家生產(chǎn)糖原染色試劑盒推薦廠家素染色液100mlHE染色屬于常規(guī)切片HE染色的明礬蘇木素的一種。
糖原及粘液染色法注意事項:1、糖原的固定要及時,而且標本要新鮮。2、如用無水酒精作糖原的固定劑,有它的弊病,因無水酒精滲透較慢,而且容易產(chǎn)生極化,(極化是糖原顆粒趨向于細胞的一端)。故用Gendre氏固定液效果較佳,其配法如下:苦味酸飽和于95%酒精85ml40%甲醛10ml冰醋酸5ml3、各種試劑必須化學純,亞硫酸鈉須有濃厚氣味,器皿必須潔凈而干燥,染色缸亦是。4、如果Schiff氏試劑,在經(jīng)過活性碳吸附漂白后不顯無色,首先應考慮試劑中的偏重亞硫酸鈉是否失效。如果偏重亞硫酸鈉氣味不濃,使用時可考慮適當?shù)脑黾佑昧俊F浯慰紤]堿性品紅本身,常常雖屬同一生產(chǎn)廠家,但不同批號,其效果就可能不同,應特別引起注意。
糖原染色在使用過程中需要注意以下幾個方面:Schiff氏染液的配制是關鍵,尤其是偏重亞硫酸鈉的質(zhì)量,打開應是粉劑,且?guī)в辛虻臍馕?,若成團或沒有氣味,則不能用,配制時使用的容器、藥勺、稱藥天平與稱藥紙等必須潔凈、無污染。新配制好的Schiff劑為無色透明液體[1],配好后可分成小份置于-20℃保存,用時取一份恢復到室溫即可。沈洪武等通過對比染色發(fā)現(xiàn),冷凍保存1年的Schiff液的染色結果與新鮮配制的染色結果一致[5]。0.5%~1%高碘酸(pH值在3.0~5.0之間),環(huán)境溫度以不高于20℃為宜,室溫高時氧化時間適當縮短;如果染色時環(huán)境溫度較高且高碘酸作用時間長,可使某些物質(zhì)成分發(fā)生非特異反應,使染色結果出現(xiàn)假陽性。因此,室溫較高時可適當縮短反應時間。糖類從組織化學技術角度來分,可分為多糖、中性粘液物質(zhì)。
PAS染色的臨床意義:1.紅細胞系統(tǒng):①紅血病或紅白血病時幼紅細胞可呈陽性反應,有時陽性反應幼紅細胞的百分比增高,陽性反應的程度也很強。有時紅細胞也呈陽性反應。②缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血(又稱地中海貧血)以及骨髓增生異常綜合征時幼紅細胞可呈陽性反應,有時陽性反應幼紅細胞的百分比也較高。有時紅細胞也可呈陽性反應。③巨幼細胞性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和白血病等疾病時,幼紅細胞為陰性反應,有時*個別幼紅細胞呈陽性反應切取的材料應小而薄,便于固定液迅速滲入內(nèi)部。福建品質(zhì)好的糖原染色試劑盒生產(chǎn)廠家
細胞核、染色體以及基因表達的研究。浙江咨詢糖原染色試劑盒產(chǎn)品介紹
糖原染色試劑盒。含乙二醇基的多糖經(jīng)過碘酸氧化,產(chǎn)生醛基,與雪夫(Schiff)試劑中無色品紅結合,形成紫紅色沉淀物定位于含糖原的胞漿中。該反應稱為碘酸-雪夫(PAS)反應。(1)雪夫液配制:堿性品紅1g溶于200ml沸水中,冷卻60℃時過濾,加1mmol/L鹽酸20ml,再冷卻至25℃左右,加偏重亞硫酸鈉(Na2S2O5)2g,混合后放棕色瓶中,置暗處24h,無色即可放冰箱中保存,呈微紅色,則加活性炭1~2g,吸附過濾使成無色液體,放冰箱中保存。若溶液變紅,即不能再用。(2)10g/L過碘酸水溶液:過碘酸(HIO42H2O)1g,加蒸餾水至10ml。溶解后蓋緊放冰箱備用,一般可用3個月,變黃則失效。浙江咨詢糖原染色試劑盒產(chǎn)品介紹