中國(guó)香港瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器

實(shí)驗(yàn)室在制作培養(yǎng)基時(shí)候的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)：培養(yǎng)基分裝：培養(yǎng)基的分裝，應(yīng)按使用的目的和要求，分裝于試管、燒瓶等適當(dāng)容器內(nèi)。分裝量不得超過容器裝盛量的2/3。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還須用防水紙包扎(現(xiàn)試管一般多有用螺旋蓋者)。分裝時(shí)較好能使用半自動(dòng)或電動(dòng)的定量分裝器。分裝瓊脂斜面培養(yǎng)基時(shí)，分裝量應(yīng)以能形成2/3底層和1/3斜面的量為恰當(dāng)。分裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒，以利于培養(yǎng)基的徹底滅菌。每批培養(yǎng)基應(yīng)另外分裝20ml培養(yǎng)基于一小玻璃瓶中，隨該批培養(yǎng)基同時(shí)滅菌，以為測(cè)定該批培養(yǎng)基較終pH之用。半固體培養(yǎng)基，指在液體培養(yǎng)基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態(tài)的培養(yǎng)基。中國(guó)香港瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基制備基本方法：培養(yǎng)基配方的選定，同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會(huì)有某些差別。因此，除所用的是標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外，一般均應(yīng)盡量收集有關(guān)資料，加以比較核對(duì)，再依據(jù)自己的使用目的加以選用，記錄其來源。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)整，培養(yǎng)基各成分完全溶解后，應(yīng)進(jìn)行pH的初步調(diào)正，因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會(huì)有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2。而腸浸液pH卻會(huì)有明顯的升高。因此，對(duì)這個(gè)步驟，操作者應(yīng)隨時(shí)注意探索經(jīng)驗(yàn)、以期能掌握培養(yǎng)基的很終pH，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。pH調(diào)正后，還應(yīng)將培養(yǎng)基煮沸數(shù)分鐘，以利培養(yǎng)基沉淀物的析出。中國(guó)澳門培養(yǎng)基制備器一般微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞在水中煮沸后即被殺死，但細(xì)菌的芽胞有較強(qiáng)的抗熱性。

⑴倒置的小管充滿培養(yǎng)基，不留氣泡。⑵在關(guān)閉殺菌鍋的排氣閥之前，將鍋內(nèi)的氣體排空。⑶試管塞不要塞得太緊。使用硅膠塞時(shí)，請(qǐng)勿使用橡膠塞。⑷不可過早打開殺菌鍋，等殺菌鍋內(nèi)的氣壓和溫度降到與室溫相同或相差不大時(shí)再打開殺菌鍋。如果按照以上方法操作還有氣泡，可以用水作為培養(yǎng)基組的對(duì)照試驗(yàn)。如果培養(yǎng)基組有氣泡，對(duì)照組沒有氣泡，可以確定培養(yǎng)基本身原因。為有效體現(xiàn)培養(yǎng)基其生物學(xué)特性，其制備生長(zhǎng)及繁殖需要特定的PH范圍。

培養(yǎng)基是生物制品領(lǐng)域中常用的物質(zhì)，在細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)中十分必要，但是現(xiàn)有技術(shù)中有些培養(yǎng)基的某種組份容易分解，造成保存時(shí)間短等問題，導(dǎo)致培養(yǎng)基的使用成本十分高。其中，在動(dòng)物培養(yǎng)基中，谷氨酰胺是一種必要的組份，但是在常溫下，很短的時(shí)間內(nèi)，約7-10日中培養(yǎng)基中的谷氨酰胺成份就可降解90％以上，這給其商品化帶來很大的困難。這樣的培養(yǎng)基在現(xiàn)有技術(shù)中很多，都具有上述的缺陷，例如，中國(guó)CN1087778C公開了一種雜交瘤細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基，其中包含有谷氨酰胺成份，但是這種培養(yǎng)基的保存時(shí)間十分有限，很難達(dá)到商業(yè)使用的目的。調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh) 各種微生物對(duì)培養(yǎng)基的Eh要求不同。

培養(yǎng)基配置原則：控制pH條件，培養(yǎng)基的pH必須控制在一定的范圍內(nèi)，以滿足不同類型微生物的生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類微生物生長(zhǎng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的很適pH條件各不相同，一般來講，細(xì)菌與放線菌適于在pH7-7.5范圍內(nèi)生長(zhǎng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內(nèi)生長(zhǎng)。值得注意的是，在微生物生長(zhǎng)繁殖和代謝過程中，由于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基pH發(fā)生變化，若不對(duì)培養(yǎng)基pH條件進(jìn)行控制，往往導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)速度下降或（和）代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此，為了維持培養(yǎng)基pH的相對(duì)恒定，通常在培養(yǎng)基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。培養(yǎng)基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂，較好一次完成，不要中斷。內(nèi)蒙古培養(yǎng)基滅菌 培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基制備器解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。中國(guó)香港瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基配置原則：滅菌處理，要獲得微生物純培養(yǎng)，必須避免雜菌污染，因此對(duì)所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對(duì)培養(yǎng)基而言，更是要進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌。對(duì)培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達(dá)到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中，長(zhǎng)時(shí)間高溫會(huì)使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養(yǎng)基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對(duì)糖類要求較高的培養(yǎng)基，可先將糖進(jìn)行過濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合；長(zhǎng)時(shí)間高溫還會(huì)引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽(yáng)離子（特別是鈣、鎂、鐵離子）結(jié)合形成難溶性復(fù)合物而產(chǎn)生沉淀。中國(guó)香港瓊脂滅菌 培養(yǎng)基制備器

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