培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備:―般要求:正確制備培養(yǎng)基是微生物檢驗(yàn)的好基礎(chǔ)步驟之一,使用脫水培養(yǎng)基和其他成分,尤其是含有有毒物質(zhì)(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時(shí),應(yīng)遵守良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范和生產(chǎn)廠商提供的使用說明。培養(yǎng)基的不正確制備會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)質(zhì)量問題。使用商品化脫水合成培養(yǎng)基制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)嚴(yán)格按照廠商提供的使用說明配制。如重量(體積)、pH制備日期、滅菌條件和操作步驟等。實(shí)驗(yàn)室使用各種基礎(chǔ)成分制備培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)按照配方準(zhǔn)確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養(yǎng)基名稱和類型及試劑級(jí)別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號(hào)、pH、培養(yǎng)基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間)、配置日期、人員等,以便溯源。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn):容器可自行拆卸更換和消毒,操作方便。中國澳門自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基制備的要點(diǎn):培養(yǎng)基滅菌處理:分裝完成的培養(yǎng)基應(yīng)馬上滅菌。其殺毒滅菌方式主要有三種類型:高壓蒸汽滅菌方式,此方法可用于大多數(shù)耐熱培養(yǎng)基。對(duì)于小份:使用121°C十五分鐘;大份:121°C三十分鐘;對(duì)于含碳水化合物的中.海培養(yǎng)基,需113~115°C十五分鐘。滅菌以避免糖分的破壞。煮沸滅菌法方式,此方法可用于含有不耐高溫物質(zhì)的培養(yǎng)基。過濾除菌方式,過濾除菌,采用無菌技術(shù)定量添加培養(yǎng)基。血液和可以用無菌技術(shù)抽取并加入冷卻至約五十度的培養(yǎng)基中。當(dāng)中'海培養(yǎng)基中含有不耐熱物質(zhì)時(shí)可以使用此方法。中國澳門瓊脂培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì),也是細(xì)胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
培養(yǎng)基的配制:分裝:一般培養(yǎng)基放在三角瓶或試管中滅菌使用。三角瓶:若作靜置培養(yǎng),則100ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,很多不能超過150ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,否則滅菌時(shí)培養(yǎng)基沸騰容易污染棉塞,造成染菌;若作搖瓶培養(yǎng),則15~20ml培養(yǎng)基/250ml的三角瓶,保證通氣良好。試管分裝:液體培養(yǎng)基一般裝4~5ml,約試管的1/4高度;固體斜面培養(yǎng)基一般裝3~4ml,約試管的1/5高度。包扎:分裝好后,塞上棉塞,在用牛皮紙將棉塞包裹好,防止滅菌時(shí)水份進(jìn)入把棉塞弄濕。滅菌:按配方上要求的溫度、壓力進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。如果滅菌的溫度太高,營養(yǎng)成分會(huì)被破壞,培養(yǎng)基中的糖、氨基酸會(huì)使培養(yǎng)基的顏色變深。擺斜面:滅菌后需要擺斜面的試管要趁熱斜著擺放,使其凝固成為一個(gè)斜面,約占試管長度的1/2。貯存:培養(yǎng)基在30℃下放置,無污染的即可使用。一般用牛皮紙包裹好存放于2-8℃冰箱中備用。
干粉培養(yǎng)基有哪些注意事項(xiàng):①熔化培養(yǎng)基制備必須在玻璃容器中進(jìn)行,如果使用銅或鐵器皿,會(huì)影響細(xì)菌的生長。②注意按照先加水再加顆粒干粉培養(yǎng)基順序,反之則不利于培養(yǎng)基溶解。③單在必要時(shí)進(jìn)行加熱溶解操作,其加熱溫度也不要過高時(shí)間不要過長,主要原因是高溫會(huì)破壞瓊脂和培養(yǎng)基中的一些營養(yǎng)成分。④生產(chǎn)的干粉培養(yǎng)基和顆粒培養(yǎng)基都經(jīng)過pH校準(zhǔn),使用時(shí)無需特殊驗(yàn)證。因?yàn)楦邏簳?huì)影響pH值,則應(yīng)在高壓后驗(yàn)證pH值。⑤液體培養(yǎng)基通常是預(yù)先包裝好的,分裝時(shí)應(yīng)注意每管的用量不得高于試管的三分之二。⑥高壓后冷卻至五六十度環(huán)境,再導(dǎo)入平板,否則會(huì)形成更多的水蒸氣,導(dǎo)致細(xì)菌分離數(shù)量。培養(yǎng)基制備器放入燒杯或瓷缸中,慢慢加入少量所需水,邊加入邊用玻璃棒攪拌。
簡單制作培養(yǎng)基,需要完成以下幾個(gè)主要步驟:需要對(duì)其進(jìn)行消毒處理,普通介質(zhì)使用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。本發(fā)明適用于各種介質(zhì)的制備,如無特殊要求,可用于滅菌。一些熱成分,如碳水化合物,應(yīng)該單獨(dú)制備20%或更多的濃縮液,過濾或間斷殺菌,然后通過無菌操作技術(shù)加入到培養(yǎng)液中。在低溫下,明膠培養(yǎng)基也能殺菌。血、體液及素應(yīng)經(jīng)無菌處理后,加至約50℃冷卻培養(yǎng)基中。需要對(duì)培養(yǎng)基的質(zhì)量進(jìn)行檢測(cè)。每次處理完培養(yǎng)基,都要仔細(xì)檢查,如破損、浸漬、顏色異常、棉塞污染等,要進(jìn)行篩選和棄置,才能確定pH值。培養(yǎng)基培養(yǎng)一晚,若有細(xì)菌生長,培養(yǎng)基將被丟棄。常規(guī)菌株接種1×2管或瓶培養(yǎng)基,24h培養(yǎng),對(duì)生長不良或無菌的菌株進(jìn)行培養(yǎng),追蹤其產(chǎn)生原因,并反復(fù)接種。如不發(fā)生變化,應(yīng)丟棄培養(yǎng)基,禁止使用。培養(yǎng)基通常采用高壓蒸汽滅菌。廣西不銹鋼內(nèi)桶培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器可以將配置、滅菌合二為一,較后恒溫保持等待分裝。極大地提高了效率。中國澳門自動(dòng)培養(yǎng)基制備器
配制培養(yǎng)基需要哪些制備:(1)稱出規(guī)定數(shù)量的瓊脂和蔗糖,加水直到培養(yǎng)基較終容積的34,加熱溶解,完全融解后的溶液是透明的。在配制液體培養(yǎng)基(不加瓊脂)時(shí)無需加熱。(2)按需要加入一定量的各種貯存母液,包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他特殊附加物。吸取母液要使用專一的移液管。如有必要,培養(yǎng)基中所需的維生素,可在高壓滅菌之后通過減壓過濾裝置或微孔過濾器滅菌后再加入。(3)蒸餾水定容。充分混合后調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH,一般以5.66.0為好。(4)培養(yǎng)基分裝,分裝量一般以占培養(yǎng)容器的1514為宜。之后在24h內(nèi)完成高壓滅菌,也可以高壓滅菌后再進(jìn)行培養(yǎng)基的無菌分裝,室溫下存放備用。暫時(shí)不用的培養(yǎng)基應(yīng)放置于10攝氏度下保存,而含有生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的培養(yǎng)基在45攝氏度保存更佳。中國澳門自動(dòng)培養(yǎng)基制備器