培養(yǎng)基制備的基本方法:1、培養(yǎng)基配方的選定:同一種培養(yǎng)基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此,除所用的是標準方法,應嚴格按其規(guī)定進行配制外,一般均應盡量收集有關(guān)資料,加以比較核對,再依據(jù)自己的使用目的,加以選用,記錄其來源。2、培養(yǎng)基的制備記錄:每次制備培養(yǎng)基均應有記錄,包括培養(yǎng)基名稱,配方及其來源,和各種成份的牌號,終pH值、消毒的溫度和時間制備的日期和制備者等,記錄應復制一份,原記錄保存?zhèn)洳?,復制記錄隨制好的培養(yǎng)基一同存放、以防發(fā)生混亂。調(diào)節(jié)氧化還原電位(Eh) 各種微生物對培養(yǎng)基的Eh要求不同。內(nèi)蒙古培養(yǎng)基制備器售后服務
固體斜面培養(yǎng)基配制:培養(yǎng)基各成份的混合和溶化:培養(yǎng)基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋,以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中,使細菌不易生長。較好使用不銹鋼萵加熱溶化,可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用,應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化,迄至煮沸。如為瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發(fā)而丟失的水分,較后必須加以補足。培養(yǎng)基pH的初步調(diào)正:因培養(yǎng)基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養(yǎng)基各成分完全溶解后,應進行PH的初步調(diào)正。貴州自動攪拌培養(yǎng)基制備器培養(yǎng)基由于配制的原料不同,使用要求不同,而貯存保管方面也稍有不同。
微生物發(fā)酵培養(yǎng)基配制注意事項:①養(yǎng)分濃度和配比合適:微生物只有在培養(yǎng)基中養(yǎng)分濃度合適的情況下才能生長良好是合適的。當養(yǎng)分濃度過低時,不能滿足微生物正常生長的需要。②微生物培養(yǎng)基pH條件控制:培養(yǎng)基的pH必須控制在一定范圍內(nèi),以滿足不同種類微生物的生長繁殖或產(chǎn)生代謝物。各種微生物生長繁殖或代謝產(chǎn)物產(chǎn)生的較佳pH條件不同。通常細菌和放線菌適合在7~7.5pH范圍內(nèi)生長,酵母菌和霉菌一般在4.5~6pH范圍內(nèi)生長。③微生物培養(yǎng)基原料來源選擇:培養(yǎng)基配制時,應盡可能使用低廉易得的原料作為培養(yǎng)基成分。尤其在發(fā)酵行業(yè),培養(yǎng)基用量大,使用成本較低原料實現(xiàn)產(chǎn)品附加價值。例如在微生物單細胞蛋白的工業(yè)化生產(chǎn)過程中,制糖業(yè)含蔗糖廢液、乳業(yè)含乳糖廢液、大豆廢液工業(yè)和黑色廢物、造紙工業(yè)中含有戊糖和己糖的亞硫酸鹽紙漿等經(jīng)常被作為培養(yǎng)基原料使用。④成品培養(yǎng)基滅菌處理、為了獲得微生物的純培養(yǎng)物,必須避免被細菌污染,所以對使用的設備和工作場所進行消毒和消毒。對于微生物培養(yǎng)基要進行嚴格的滅菌處理。
天然培養(yǎng)基中血清主要作用:對培養(yǎng)中的細胞起到某些保護作用:有一些細胞,如內(nèi)皮細胞、骨髓樣細胞可以釋放蛋白酶,血清中含有抗蛋白酶成分,起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的,則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因為胰蛋白酶已經(jīng)被較廣用于貼壁細胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度,可以保護細胞免受機械損傷,特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時,粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝中起重要作用,如SeO3、硒等。自動培養(yǎng)基制備器可以快速的準備好滅菌,放入滅菌鍋。
微生物限度:細胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品,其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖,導致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效??刂萍毎囵B(yǎng)基中細菌和霉菌,是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民當?shù)厮幍洹?005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標準,并嚴于該標準,規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的細菌數(shù)每1g不得超過200個,霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華人民當?shù)厮幍?005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為細菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。要根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求選擇適宜的營養(yǎng)物質(zhì),配制針對性強的培養(yǎng)基。上海Systec培養(yǎng)基制備器
培養(yǎng)基制備器可以將配置、滅菌合二為一,較后恒溫保持等待分裝。極大地提高了效率。內(nèi)蒙古培養(yǎng)基制備器售后服務
配制好的培養(yǎng)基保存:滅菌以后培養(yǎng)基應該迅速冷卻至所需溫度,避免長時間保存在滅菌鍋內(nèi),造成過度滅菌,影響培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分或選擇性效果。所配制的培養(yǎng)基的量,應該是在較長保存期限內(nèi)正好使用完。含染料的培養(yǎng)基應閉光保存;倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完,應于冷藏保存,如果保存時間超過2天,應將其放入密封的塑料袋中保存;配好的肉湯類培養(yǎng)基如果保存時間超過2個星期,應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發(fā)。內(nèi)蒙古培養(yǎng)基制備器售后服務