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來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-02-08

雙光子顯微鏡的應(yīng)用由于適合動(dòng)態(tài)成像,雙光子顯微鏡一經(jīng)問(wèn)世便很快應(yīng)用于神經(jīng)科學(xué)、遺傳發(fā)育、藥物代謝等領(lǐng)域。雙光子顯微鏡能夠在細(xì)胞甚至是亞細(xì)胞水平上對(duì)***神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)、離子濃度、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、分子相互作用等進(jìn)行直接成像監(jiān)測(cè),而且能夠進(jìn)行光裂解、光轉(zhuǎn)染和光損傷等光學(xué)操縱。同時(shí),雙光子顯微鏡能動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)**在體內(nèi)的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,并可對(duì)**治療過(guò)程中*細(xì)胞的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。隨著光學(xué)技術(shù)、熒光探針技術(shù)、計(jì)算機(jī)成像技術(shù)的發(fā)展,雙光子顯微技術(shù)會(huì)得到更大提升和更廣的應(yīng)用,未來(lái)不僅用于基礎(chǔ)研究,也將擴(kuò)展到臨床應(yīng)用。雙光子顯微鏡使用的是高能量鎖模脈沖器。國(guó)外bruker雙光子顯微鏡商家電話

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從雙光子到三光子:科學(xué)家正在從雙光子轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡。1996年,ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk同導(dǎo)師實(shí)驗(yàn)室)讀博期間發(fā)明了三光子顯微鏡,如果雙光子吸收可行,那么三光子看起來(lái)也是自然的發(fā)展方向。三光子成像使用更長(zhǎng)的波長(zhǎng),大約在1.3和1.7微米,其成像深度也比雙光子更深,目前記錄約為2.2毫米,人類大腦皮層厚約4毫米。相比雙光子顯微鏡,三光子還要求以較低重頻使用更強(qiáng)和更短的激光脈沖,而傳統(tǒng)的鈦寶石激光器難以達(dá)到這些要求,但是對(duì)于摻鐿光纖飛秒光參量放大器則非常容易,比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)。國(guó)外布魯克雙光子顯微鏡圖像對(duì)比度雙光子顯微鏡是新型的熒光顯微鏡,其原理大致是這樣的;

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和很多偉大的科學(xué)發(fā)明一樣,雙光子顯微鏡的出現(xiàn)也有一點(diǎn)偶然,但正是那瞬間的靈感為生物科學(xué)尤其是神經(jīng)科學(xué)帶來(lái)了一種**性的成像技術(shù):雙光子激發(fā)熒光顯微鏡。1990年初,當(dāng)WinfriedDenk剛從康奈爾大學(xué)博士畢業(yè)準(zhǔn)備前往瑞士讀博后時(shí),他看了一本關(guān)于激光掃描顯微鏡的書(shū),從中了解到非線性光學(xué)效應(yīng)——強(qiáng)光和物質(zhì)的相互作用。當(dāng)時(shí),Denk有同事研究生物樣品中的鈣離子但苦于沒(méi)有強(qiáng)大的紫外激光器和光學(xué)元件,于是他就想到如果使用雙光子吸收就能夠繞開(kāi)紫外,換言之,與其通過(guò)一個(gè)紫外光子激發(fā)標(biāo)記的鈣離子,通過(guò)兩個(gè)雙倍波長(zhǎng)的可見(jiàn)光光子也能激發(fā)相同的熒光。有了想法后馬上實(shí)驗(yàn)。借了一套染料飛秒激光器,Denk聯(lián)合他的導(dǎo)師WattWebb及其博士生JamesStrickler只用六個(gè)小時(shí)就完成了實(shí)驗(yàn)搭建,采集數(shù)據(jù)則用了兩到三天,于是一篇里程碑式的文章就此誕生了。

FHIRM-TPM 2.0擴(kuò)大了微型雙光子顯微鏡的適用性和實(shí)用性,使神經(jīng)科學(xué)家能夠更自由地探索更多新的行為范式,包括身體運(yùn)動(dòng)、長(zhǎng)時(shí)程的復(fù)雜過(guò)程,如學(xué)習(xí)和記憶,社會(huì)互動(dòng)和恐懼條件反射,甚至是慢性疾病的進(jìn)展和老化,如神經(jīng)發(fā)生和再生,疾病進(jìn)展和衰老,以破譯大腦的奧秘。在一批“早鳥(niǎo)項(xiàng)目”中,該系統(tǒng)已被多個(gè)研究組應(yīng)用于不同的模式動(dòng)物和行為范式,如小鼠的社交新穎性識(shí)別、斑胸草雀受***調(diào)控后大腦特定神經(jīng)元變化、新型神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿探針的傳導(dǎo)適應(yīng)性分析以及獼猴三腦區(qū)成像等多項(xiàng)研究。依托兩代微型化雙光子成像技術(shù),該團(tuán)隊(duì)還在南京市江北新區(qū)建立了規(guī)模化高通量腦功能成像的南京腦觀象臺(tái)(Nanjing Brian Observatory),于2020年12月10日舉辦了落成典禮。通過(guò)與世界范圍內(nèi)的神經(jīng)科學(xué)家進(jìn)行廣合作,腦觀象臺(tái)現(xiàn)正在服務(wù)三十多個(gè)科研項(xiàng)目,成為開(kāi)展大型腦科學(xué)問(wèn)題研究的重要科研服務(wù)平臺(tái)。雙光子顯微鏡成像技術(shù)及不同轉(zhuǎn)基因小鼠開(kāi)展對(duì)多種臟器的成像研究。

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光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡本質(zhì)的區(qū)別在于,光學(xué)顯微鏡:用的是可見(jiàn)光電子顯微鏡:用的是高頻電子射波有什么區(qū)別,在于一個(gè)基本的原理,光的衍射。。。光波是一個(gè)有趣的東西,其中有一項(xiàng),如果物體的體積小于光的波長(zhǎng),光一般可以繞過(guò)去,不發(fā)生明顯變化。也就是說(shuō),有這個(gè)物體和沒(méi)這個(gè)物體,在這種情況下,光是不會(huì)發(fā)生明顯改變的??梢?jiàn)光的波長(zhǎng)(肉眼):380~780納米,也就是,如果比380納米還要小的東西,用光學(xué)顯微鏡,無(wú)論你放大多少倍,也是看不見(jiàn)的。因?yàn)楣饫@過(guò)去了。。。光的衍射為了克服這個(gè)問(wèn)題,科學(xué)家用波長(zhǎng)更短的光去照射物體,也是就被觀測(cè)物。比如10納米級(jí)的光,這樣,就能看到我們用肉眼無(wú)論如何都看不見(jiàn)的東西。這就是電子顯微鏡多說(shuō)一句,光速是不變的。光速=頻率×波長(zhǎng)。波長(zhǎng)越短,頻率越大。。頻率越大,光波的能量越大。這就是為什么電子顯微鏡的功率越大,能看到的東西越小。顏色取決于物體能反射光的波長(zhǎng)的長(zhǎng)短當(dāng)你看到的物體小于較小可見(jiàn)光的波長(zhǎng),那它就是沒(méi)有顏色的。。。因?yàn)轭伾侨庋蹖?duì)于可見(jiàn)光頻率在大腦中的投影。。。。所以只能把他們統(tǒng)一變?yōu)楹诎住?。。沒(méi)有顏色不是透明的意思,它們不是肉眼可見(jiàn)顏色的定義中包含的。雙光子顯微鏡可以精確穿透較厚標(biāo)本進(jìn)行定點(diǎn)、有生命體的觀察!國(guó)外bruker雙光子顯微鏡商家電話

雙光子顯微鏡能夠進(jìn)行光裂解、光轉(zhuǎn)染和光損傷等光學(xué)操縱。國(guó)外bruker雙光子顯微鏡商家電話

通過(guò)對(duì)微型光學(xué)系統(tǒng)的重新設(shè)計(jì),F(xiàn)HIRM-TPM 2.0成像視野擴(kuò)大至420×420平方微米,微型物鏡的工作距離擴(kuò)展至1毫米,以實(shí)現(xiàn)非侵入式成像;嵌入了可拆卸的快速軸向掃描模塊,實(shí)現(xiàn)了180微米深度的三維體成像和多平面快速切換的實(shí)時(shí)成像。該模塊由一個(gè)快速的電動(dòng)變焦透鏡和一對(duì)中繼透鏡組成,在不同深度成像時(shí)保持放大倍率恒定。其中,變焦模塊重量1.8克,研究人員可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求自由拆卸。此外,新版微型化成像探頭還可整體即時(shí)拔插,極大地簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作,避免了長(zhǎng)周期實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)動(dòng)物的干擾。在重復(fù)裝卸探頭追蹤同一批神經(jīng)元時(shí),視場(chǎng)旋轉(zhuǎn)角小于0.07弧度,邊界偏差小于35微米。國(guó)外bruker雙光子顯微鏡商家電話