吉林RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

來源: 發(fā)布時間:2024-08-24

    平衡鹽溶液(balancedsaltsolution,BSS)簡稱鹽溶液,集緩沖液的緩沖能力、生理鹽水的等滲性以及培養(yǎng)液的營養(yǎng)供應(yīng)特點于一體,兼具維持滲透壓、緩沖和調(diào)節(jié)溶液的酸堿度、同時供給細(xì)胞生存所必需的能量和無機離子成分的作用。各種BSS的緩沖系統(tǒng)有所不同,其中以Hank’s液和Earle’s液為例,它們主要差別在于碳酸氫鈉的水平,在Earle’s(g/L)中比在Hank’s(g/L)中高。碳酸氫鈉需用高水平的CO2平衡,以維持溶液的pH值。Eagles液在空氣水平的CO2中,溶液會變堿,Hank’s液在CO2培養(yǎng)箱中會變酸。如果希望在CO2培養(yǎng)箱中保存**,需要用Earle’s液,。如果**是清洗將要在細(xì)胞培養(yǎng)基中儲存的**,用Hank’s液就可以了。表3-1幾種常用的平衡鹽溶液配方(g/L)一些BSS含有的Ca2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成分,同時參與許多重要的細(xì)胞功能活動。但它們有使細(xì)胞凝集的作用,在配制分散細(xì)胞的消化液和特殊用途的細(xì)胞洗滌時,宜采用Ca2+、Mg2+含量較低的Dulbecco液或無Ca2+、Mg2+的D-Hanks液,或者PBS液。概述基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基主要包括199、MEM、RPMI-1640、DMEM、DMEM/F12等。主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。RPMI1640培養(yǎng)基在抗體生產(chǎn)和免疫研究中有重要作用。吉林RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

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    三)、試驗結(jié)果:初代培養(yǎng):使用本發(fā)明的消毒方法,消毒成功率能達(dá)到80%,誘導(dǎo)培養(yǎng)基萌芽率能達(dá)到90%,可以成功建立無菌再生體系。繼代培養(yǎng):使用本發(fā)明的增殖培養(yǎng)基,繡球組培苗增殖倍率能夠達(dá)到8~10倍,組培苗高度一致,生長健壯。生根培養(yǎng):使用本發(fā)明的生根培養(yǎng)基,繡球組培苗生根率能夠達(dá)到95%,根系發(fā)達(dá),健壯,可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明所指ms培養(yǎng)基是murashige和skoog研制的培養(yǎng)基,其成分配方表見表1。1/2ms培養(yǎng)基是指大量元素含量為ms培養(yǎng)基的一半,其他成分用量相同。表1、ms培養(yǎng)基成分表本發(fā)明涉及的植物生長調(diào)節(jié)劑有:6-ba—6-芐氨基嘌呤;ga3—赤霉素;iba—吲哚丁酸,naa—萘乙酸。本發(fā)明中的誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基均為液體培養(yǎng)基。本具體實施方式的實施例均為本發(fā)明的較佳實施例,并非依此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍,故:凡依本發(fā)明的結(jié)構(gòu)、形狀、原理所做的等效變化,均應(yīng)涵蓋于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。黑龍江DMEM高糖培養(yǎng)基答疑解惑F12培養(yǎng)基能夠支持細(xì)胞的持續(xù)分裂。

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    促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為:在s4中,將s3中的無菌外植體接入增殖培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術(shù)方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免增殖培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng),植物材料能夠快速適應(yīng)增殖培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為:在s4中,每隔8~12周轉(zhuǎn)接入新的增殖培養(yǎng)基。通過采用上述技術(shù)方案,經(jīng)過8~12周后,增殖培養(yǎng)基的效果將會減弱,植物材料也會污染增殖培養(yǎng)基,需要及時更換。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為:在s5中,將s4中的繡球組培苗接入生根培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)8~12周。通過采用上述技術(shù)方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免生根培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng),植物材料能夠快速適應(yīng)生根培養(yǎng)基,促使植物材料快速生長、芽體健壯。本發(fā)明在一較佳示例中可以進(jìn)一步配置為:在s2中,外植體消毒的具體步驟為將樹莓外植體葉片剪去,自來水沖洗干凈。無酚紅培養(yǎng)基在細(xì)胞實驗中減少了潛在的毒性作用。

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    所以做過強檢的**器還必須進(jìn)行**效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提**器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但**物品的實際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致**物品不徹底,影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基**不徹底,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣**器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。(三)**時的注意事項使用高壓蒸氣**器時,首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時,排除**器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,才可關(guān)閉排氣孔。假如**器內(nèi)仍存留有部分空氣時,剛壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值,但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多,剛二者相差也越大。差也越大,器內(nèi)溫度不足,**則不徹底。表蒸汽壓力與溫度的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)密度(kg/cm2)溫度(℃)1126表高壓蒸汽**器中溫度與冷空氣排出量的關(guān)系蒸汽壓力(kPa)所達(dá)溫度。MEM培養(yǎng)基在細(xì)胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出高效的穩(wěn)定性。山西RPMI1640培養(yǎng)基價格查詢

DMEM培養(yǎng)基提供了細(xì)胞生長所需的基本營養(yǎng)成分。吉林RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑

    對于大多數(shù)哺乳類動物細(xì)胞,滲透壓在260~320mOsm/kg的范圍內(nèi)都適宜。在生產(chǎn)、配制細(xì)胞培養(yǎng)基的過程中,滲透壓的測定較為重要,有助于防止在生產(chǎn)、配制過程中出現(xiàn)稱量等方面的錯誤。反應(yīng)器高密度培養(yǎng)動物細(xì)胞過程,在添加碳酸氫鈉的過程中注意滲透壓的監(jiān)控,防止?jié)B透壓過高對細(xì)胞的損害。溫度溫度對細(xì)胞培養(yǎng)基有較大的影響,溫度過高可引起營養(yǎng)成份的降解或破壞,細(xì)胞培養(yǎng)基的pH、離子強度和電解常數(shù)pKa也可能受到影響。如細(xì)胞培養(yǎng)液中的谷氨酰胺,在高溫條件下降解的速度較快,如35℃貯存時,放置3天降解25%左右,在4℃貯存3周降解約20%。粘滯性及表面張力含血清細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性主要是由血清引起的,在轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)貼壁細(xì)胞時,培養(yǎng)液的粘滯性對細(xì)胞生長沒有多大影響;但在生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)細(xì)胞時,細(xì)胞培養(yǎng)液的粘滯性則直接影響攪拌轉(zhuǎn)速控制及攪拌剪切力對細(xì)胞造成的損傷程度。表面張力對細(xì)胞培養(yǎng)有較大的作用,尤其在利用生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮培養(yǎng)時,攪拌和通氣都會引起泡沫的產(chǎn)生。對于含血清培養(yǎng)液,由于血清中多種蛋白的存在,攪拌時產(chǎn)生的氣泡較多,氣泡的上升運動對細(xì)胞的損傷程度還有爭議,但氣泡的破裂對細(xì)胞有明顯的損傷作用。為降低這種損傷。吉林RPMI1640培養(yǎng)基答疑解惑