導(dǎo)致細胞培養(yǎng)基變質(zhì)失效??刂萍毎囵B(yǎng)基中**和霉菌,是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華******典》2005版二部附錄第100頁的口服給*制劑的微生物限度標(biāo)準(zhǔn),并嚴(yán)于該標(biāo)準(zhǔn),規(guī)定細胞培養(yǎng)基產(chǎn)品的**數(shù)每1g不得超過200個,霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為**數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。細胞生長試驗這是一個性能特性表述的要求。細胞培養(yǎng)基的功能就是培養(yǎng)哺乳類動物細胞,因此經(jīng)過細胞培養(yǎng)效果的檢驗是產(chǎn)品***劣的直觀表述,這也是很多生物制*用戶要求的一項指標(biāo)。目前國內(nèi)尚無細胞培養(yǎng)和計數(shù)的法定方法,可參考《體外培養(yǎng)的原理與技術(shù)》中細胞計數(shù)法論述的內(nèi)容給出。按產(chǎn)品說明書配制培養(yǎng)液進行細胞培養(yǎng),前四天用含10%小牛血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)并計數(shù),檢查細胞培養(yǎng)基是否有促生長的能力。后三天用不含小牛血清的培養(yǎng)液維持培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)并計數(shù),檢查細胞培養(yǎng)基中是否有不利細胞生長的***。本試驗用細胞為VERO細胞。四、細胞培養(yǎng)基的使用方法細胞培養(yǎng)基的種類繁多,細胞培養(yǎng)方式也較多。無血清培養(yǎng)基為細胞培養(yǎng)提供了更清晰的背景。安徽基礎(chǔ)培養(yǎng)基報價
cs液體培養(yǎng)基和1/2cs液體培養(yǎng)基在用不同ph超純水(ph為)配制時的ph都較為穩(wěn)定,在未調(diào)ph的情況下,可直接用于多種植物培養(yǎng)。如圖8所示。(2)以克新18號馬鈴薯無菌苗為例,觀察在未調(diào)ph和將ph調(diào)至:a、培養(yǎng)基制作方法:隨機選取超純水,測得其ph為,用于配制8種不同的液體培養(yǎng)基。第一種:1/2ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第二種:1/2cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第三種:ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第四種:cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第五種:1/,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第六種:1/,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第七種:,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第八種:,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至。b、培養(yǎng)方法:從培養(yǎng)實例4所述培養(yǎng)基獲得長勢**的馬鈴薯幼苗,在清水中緩苗2-3d后選取長勢一致的馬鈴薯幼苗,如圖9-a所示,置于上述8種不同液體培養(yǎng)基8d,每隔2d更新1次液體培養(yǎng)基;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時間14h、黑暗時間10h)條件下培養(yǎng)。湖北RPMI1640培養(yǎng)基進貨價MEM培養(yǎng)基含有多種必需氨基酸和維生素,適合細胞培養(yǎng)。
附圖說明圖1是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌苗在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗蓮座葉及根系發(fā)育;c:萌發(fā)率;d主根長度;a和b中bar=;圖2是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌植株地上部分及根系發(fā)育;c:無菌植株花***發(fā)育(左)和花粉的亞歷山大染色(右);d:主根長度;e:株高;f:蓮座葉長度;g:成熟花粉活力;a中bar=、b中bar=、c中花***bar=、c中花粉bar=15um;圖3是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,油菜無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:主根長;f:大于;a中bar=、b中bar=;圖4是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:根數(shù);a和b中bar=;圖5是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥葉片及根愈傷**誘導(dǎo)的對比效果圖,a:葉片愈傷**;b:葉片愈傷**誘導(dǎo)率;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導(dǎo)率;a和c中bar=;圖6是cs和ms兩種培養(yǎng)基上。
但其引入的尿素和**銨成分含量過高,這對多種植物生長不利;cna一種植物**培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基及cna一種無nh4no3植物**培養(yǎng)用培養(yǎng)基分別公開了一種無硝酸培養(yǎng)基,獲得較好的培養(yǎng)效果,但新引入的硝酸鈣和硝酸鎂兩種成分均為易制爆試劑;cna一種植物組培**培養(yǎng)基公開了一種無硝酸銨培養(yǎng)基,可提高植物組培成功率,但引入了易制爆試劑硝酸鈉,且其*適用于植物離體培養(yǎng),不具有通用性。此外,現(xiàn)有的植物**培養(yǎng)基,包括ms、b5、n6以及其他公開的植物**培養(yǎng)基,它們被用于配制液體培養(yǎng)基時的ph值波動大,在用于植物水培時均需要調(diào)節(jié)ph,過程繁瑣,耗費時間。因此,急需一種既無硝酸銨、也不引入新的易制爆成分,并且培養(yǎng)效果與ms培養(yǎng)基相當(dāng)或優(yōu)于ms培養(yǎng)基的***適用于多種植物**培養(yǎng)的ph穩(wěn)定型培養(yǎng)基。技術(shù)實現(xiàn)要素:有鑒于此,本發(fā)明的目的是提供一種在不額外引入易制爆成分的前提下,去除了市場禁止流通的易制爆成分nh4no3,且ph穩(wěn)定的***適用于多種植物**培養(yǎng)的植物基本培養(yǎng)基,以解決現(xiàn)有植物**培養(yǎng)基存在的技術(shù)問題。本發(fā)明廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。無血清培養(yǎng)基確保了實驗結(jié)果的純凈性。
按中華******典2005年版二部附錄ⅧL干燥失重測定法進行。滲透壓溶劑通過半透膜由低濃度向高濃度溶液擴散的現(xiàn)象稱為滲透,阻止?jié)B透所需施加的壓力,稱為滲透壓。細胞必須生活在等滲環(huán)境中,動物細胞借助K+、Na+維持滲透平衡。大多數(shù)細胞對滲透壓有一定的耐受性。但是培養(yǎng)液滲透壓過高容易使細胞脫水萎縮,培養(yǎng)液滲透壓過低容易使細胞膨脹破裂,因此要控制培養(yǎng)基的滲透壓范圍。按中華******典2005年版二部附錄ⅨG滲透壓摩爾濃度測定法進行。**內(nèi)*****內(nèi)***是許多病原性**所產(chǎn)生的***。它的特殊性在于不是**或**的代謝產(chǎn)物,而是**死亡或解體后才釋放出來的一種具有生物活性的物質(zhì)。培養(yǎng)基**內(nèi)***過高,對生物制品*苗(如狂犬、乙肝*苗)、基因工程*品等注射用的*品都需要檢查**內(nèi)***。因此本項目的檢驗符合生物制品質(zhì)量控制要求。常規(guī)細胞培養(yǎng)基的**內(nèi)***標(biāo)準(zhǔn)定為<10EU/ml。稱取本品規(guī)定量(見表4-12)的1/100,加入**內(nèi)***檢查用水10mL溶解,吸取該溶液mL加**內(nèi)***檢查用水mL,混勻即得試樣。按中華******典2005年版二部附錄ⅪE**內(nèi)***檢查法中的凝膠法進行。微生物限度細胞培養(yǎng)基不是無菌產(chǎn)品,其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)滋生繁殖。使用減血清培養(yǎng)基能提高實驗的可重復(fù)性。浙江MEM a培養(yǎng)基價格信息
MEM培養(yǎng)基在細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性。安徽基礎(chǔ)培養(yǎng)基報價
3)擬南芥葉片愈傷**的誘導(dǎo)方法:用手術(shù)剪刀剪開長勢良好的無菌葉片,用鑷子將其取出擺放在步驟(1)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,使傷口接觸培養(yǎng)基;于溫度23-25℃、濕度50-70%、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)擬南芥根愈傷**的誘導(dǎo)方法:用鑷子取出無菌苗的根,用手術(shù)剪刀剪開后平鋪于步驟(2)的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,培養(yǎng)條件同步驟(3)。(5)cs誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)6-8d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團塊狀愈傷**,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%;擬南芥根愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)5-7d在切口處開始出現(xiàn)少量顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)20-22d獲得較大體積的淡黃色松脆型愈傷**,且在愈傷**周圍觀察到大量致密分布的白毛,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%。如圖5所示。對比培養(yǎng)例5:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例5,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導(dǎo)培養(yǎng)基的誘導(dǎo)結(jié)果為:擬南芥葉片愈傷**誘導(dǎo)時,培養(yǎng)7-10d在切口處出現(xiàn)顆粒狀愈傷**,培養(yǎng)24-26d獲得嫩綠色致密的團塊狀愈傷**,顆粒狀愈傷**誘導(dǎo)率及愈傷**總誘導(dǎo)率均為100%。安徽基礎(chǔ)培養(yǎng)基報價