將蒸過的原料置于室溫下過夜,未被殺死的孢子便發(fā)芽生長,芽孢發(fā)育成營養(yǎng)細(xì)胞,再30min便可殺死。如此連續(xù)反復(fù)進(jìn)行2-3次,亦可達(dá)到徹底**的目的。3、分批**的操作分批滅歇是在所用的發(fā)酵罐或其他培養(yǎng)裝置中進(jìn)行的,它是在配制罐中配好培養(yǎng)基后,通過**管道輸入發(fā)酵罐等培養(yǎng)設(shè)備中,然后開始**。在進(jìn)行培養(yǎng)基的間歇**之前,通常先將發(fā)酵罐等培養(yǎng)裝置的分空氣過濾器進(jìn)行**,并且用空氣將分過濾器吹干。開始**時(shí),應(yīng)先放去夾套或蛇管中的冷水,開啟排氣管閥,通過空氣管向發(fā)酵罐內(nèi)的培養(yǎng)基通入蒸汽進(jìn)行加熱,同時(shí),也可在夾套內(nèi)通蒸汽進(jìn)行間接加熱。當(dāng)培養(yǎng)基溫度升到70℃左右時(shí),從取樣管和放料管向罐內(nèi)通入蒸汽進(jìn)一步加熱,當(dāng)溫度升至120℃,罐壓為1*105Pa(表壓)時(shí),打開接種、補(bǔ)料、消泡劑、酸、堿等管道閥門進(jìn)行排汽,當(dāng)然在保溫過程中,應(yīng)注意凡在培養(yǎng)基液面下的各種進(jìn)口管道都應(yīng)通入蒸汽,而在液面以上的其余各管道則應(yīng)排放蒸汽,這樣才能不留死角,從而保證**徹底。保溫結(jié)束后,依次關(guān)閉各排汽、進(jìn)汽閥門,待罐內(nèi)壓力低于空氣壓力后,向罐內(nèi)通入無菌空氣,在夾套或蛇管中通冷水降溫,使培養(yǎng)基的溫度降到所需的溫度,進(jìn)行下一步的發(fā)酵和培養(yǎng)。DMEM培養(yǎng)基提供了適宜的pH值和滲透壓。四川F12培養(yǎng)基價(jià)格信息
若應(yīng)用于植物培養(yǎng)中的液體培養(yǎng)基制作,可不用調(diào)節(jié)ph,用超純水(ph為)充分溶解后定容,便可直接應(yīng)用于大多數(shù)植物水培。培養(yǎng)實(shí)例1:哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)(1)種子保存及消毒方法:a、擬南芥種子保存方法:哥倫比亞(col,columbia)型擬南芥種子成熟后,收取種子于,加入3-8顆變色**干燥劑,用封口膜密封后置于4℃長期保存;b、擬南芥種子**消毒方法:取出經(jīng)低溫干燥保存的種子,于無菌環(huán)境下,將適量種子置于無菌,加入適量體積的無菌水,將離心管顛倒幾次后用低速離心機(jī)離心10s,小心倒掉上清,重復(fù)3次;加入75%酒精,將離心管顛倒幾次后用低速離心機(jī)離心10s,小心倒掉上清;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入適量體積的5%naclo溶液,將離心管上下顛倒10-20次,低速離心10s后倒掉上清,重復(fù)2次;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入無菌水,使種子完全浸泡在無菌水中,于4℃放置48h后播種。在種子質(zhì)量良好的情況下,利用上述方法保存及消毒的無菌擬南芥種子,萌發(fā)率極高且?guī)缀跬瑫r(shí)出苗。(2)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。山西DMEM/F12培養(yǎng)基常見問題MEM培養(yǎng)基含有必要的氨基酸和維生素。
生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻,冷卻到40-50℃后,輸送到預(yù)先已經(jīng)**過的罐內(nèi)。(四)、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點(diǎn)***是設(shè)備要求低,不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置;操作要求低,適于手動(dòng)操作,適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模;適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)損失較多,**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降;需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻,能耗較高;不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過程的**;發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點(diǎn)***是**溫度高,可減少培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的損失;操作條件恒定,**質(zhì)量穩(wěn)定;易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作;避免了復(fù)的加熱和冷卻,提高了熱的利用率;發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點(diǎn)是對(duì)設(shè)備的要求高,需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置;操作較麻煩;染菌的機(jī)會(huì)較多;不適合于含大量固體物料的**;對(duì)蒸汽的要求高。由此可見,無論在理論上或者在實(shí)踐上,與間歇**過程相比,連續(xù)**的***十分明顯。因此,連續(xù)**越來越多地被用培養(yǎng)基的**。
cs液體培養(yǎng)基和1/2cs液體培養(yǎng)基在用不同ph超純水(ph為)配制時(shí)的ph都較為穩(wěn)定,在未調(diào)ph的情況下,可直接用于多種植物培養(yǎng)。如圖8所示。(2)以克新18號(hào)馬鈴薯無菌苗為例,觀察在未調(diào)ph和將ph調(diào)至:a、培養(yǎng)基制作方法:隨機(jī)選取超純水,測(cè)得其ph為,用于配制8種不同的液體培養(yǎng)基。第一種:1/2ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第二種:1/2cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第三種:ms未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為;第四種:cs未調(diào)ph液體培養(yǎng)基,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為;第五種:1/,其為取1/2ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第六種:1/,其為取1/2cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第七種:,其為取ms基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至;第八種:,其為取cs基本培養(yǎng)基置于ph為,調(diào)ph至。b、培養(yǎng)方法:從培養(yǎng)實(shí)例4所述培養(yǎng)基獲得長勢(shì)**的馬鈴薯幼苗,在清水中緩苗2-3d后選取長勢(shì)一致的馬鈴薯幼苗,如圖9-a所示,置于上述8種不同液體培養(yǎng)基8d,每隔2d更新1次液體培養(yǎng)基;于溫度22-23℃、濕度50-70%、光照強(qiáng)度2000-3000lux、光照和黑暗交替(光照時(shí)間14h、黑暗時(shí)間10h)條件下培養(yǎng)。F12培養(yǎng)基適用于多種類型的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
另外,酚紅作為pH值的指示劑被加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中。酚紅在產(chǎn)物純化過程中會(huì)造成干擾,并且具有一定的固醇類***樣作用,如雌***樣作用。當(dāng)用于哺乳類動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng),可能會(huì)發(fā)生一些固醇類反應(yīng)?,F(xiàn)在商業(yè)化細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量可根據(jù)需求調(diào)整。因生物反應(yīng)器具有pH在線檢測(cè)技術(shù),生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),酚紅可完全去除。細(xì)胞保護(hù)劑是保護(hù)細(xì)胞免受滲透壓變化、剪切力、氧化及氣泡作用等引起的損傷的物質(zhì)。在使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞時(shí),細(xì)胞易被機(jī)械攪拌和通氣鼓泡產(chǎn)生的流體剪切力和氣泡作用所傷害甚至破損死亡。為降低這種損傷,除優(yōu)化生物反應(yīng)器結(jié)構(gòu)和生產(chǎn)工藝外,可在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一些保護(hù)劑。其主要是通過改變細(xì)胞培養(yǎng)基物性或是對(duì)細(xì)胞具有保護(hù)作用的物質(zhì),常用的種類有血清、白蛋白、聚已二醇(PEG)、非離子性表面活性劑PluronicF68或是其他一些高分子聚合物等。3.細(xì)胞培養(yǎng)基的理化性質(zhì)動(dòng)物細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)基中不僅能存活,還要分裂增殖,合適的滲透壓、pH值等理化性質(zhì)是細(xì)胞培養(yǎng)基必須具備的前提條件。動(dòng)物細(xì)胞大多數(shù)需要輕微的堿性條件,適宜pH在~。細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值通常需經(jīng)校正的pH計(jì)來測(cè)定。在細(xì)胞生長過程中,隨細(xì)胞數(shù)量的增多和代謝活動(dòng)的加強(qiáng)。無血清培養(yǎng)基適用于需要無血清環(huán)境的細(xì)胞。湖北DMEM/F12培養(yǎng)基大概價(jià)格多少
無酚紅培養(yǎng)基減少了酚紅對(duì)細(xì)胞的影響。四川F12培養(yǎng)基價(jià)格信息
第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害;也可殺滅物品或器皿上的**,防止醫(yī)院***;在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中,消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來微生物污染的前提。(一)術(shù)語消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐(antisepsis)和無菌(asepsis)是常用術(shù)語。下面就術(shù)語概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。(如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。)(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法,但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱消毒劑(dis-infectant)。一般而言,消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱無菌操作。無菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過濾等。四川F12培養(yǎng)基價(jià)格信息