Buffer組份濃度:137mMNaCl,mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量:1L配制方法:1.稱量下列試劑,置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至,然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓**后,室溫保存。注意:上述Buffer中無二價(jià)陽離子,如需要,可在配方中補(bǔ)充1mMCaCl2和mMMgCl2。10M醋酸銨組份濃度:10M醋酸銨配制量:100ml配制方法:1.稱量g醋酸銨置于100~200ml燒杯中,加入約30ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至100ml。3.使用mm濾膜過濾**。4.密封瓶口于室溫保存。注意:醋酸銨受熱易分解,所以不能高溫高壓**。Tris-HCl平衡苯酚配制方法:1.使用原料:大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的,無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色,應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚,結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物,這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此,苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要,我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2.操作注意:苯酚腐蝕性極強(qiáng),并可引起嚴(yán)重灼傷,操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。緩沖液使用中的注意事項(xiàng)。新疆無酚紅緩沖液報(bào)價(jià)
PBS緩沖液,是生物化學(xué)研究中使用**為***的一種緩沖液,主要成分為Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,一般作為溶劑,起溶解保護(hù)試劑的作用。由于Na2HPO4和KH2PO4有二級(jí)解離,緩沖的pH值范圍很廣,而NaCl和KCl主要作用為增加鹽離子濃度。如有需要PBS還可以補(bǔ)加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/L MgCl2,以提供二價(jià)陽離子。
配制方法播報(bào)稱取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4溶于800mL蒸餾水中,用HCl調(diào)節(jié)溶液至7.4,***加蒸餾水定容至1L即可得0.01M PBS緩沖液。作用播報(bào)PBS是磷酸緩沖鹽溶液的簡(jiǎn)稱,不僅偽狂犬病毒要用它稀釋,一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。原因就是它具有鹽平衡、可調(diào)整的適宜pH緩沖作用,蒸餾水不具有鹽平衡作用,可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性;生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用,對(duì)完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在**適條件下參與生物反應(yīng),所以使用PBS是優(yōu)先。在細(xì)胞培養(yǎng)中,它通常用于洗滌傳代培養(yǎng)中的細(xì)胞,以及在計(jì)數(shù)細(xì)胞時(shí)作為稀釋溶液。 [2]PBS也不是***的,有的生物活性物質(zhì)需要的條件比PBS還要高,就需要在平衡緩沖液中加入更多的成分,維持比較好的條件保證生物活性物質(zhì)保持其**完整的特性 [1]。 上海DPBS緩沖液哪家好PBS溶液一般指磷酸緩沖鹽溶液,不可以喝。
2.配制方法:將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇(24:1)混合均勻后,移入棕色玻璃瓶中4℃保存。10%(W/V)SDS組份濃度:10%(W/V)SDS配制量:100ml配制方法:1.稱量10g高純度的SDS置于100-200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水,68℃加入溶解2.滴加濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至3.將溶液定容至100ml后,室溫保存。2NNaOH組份濃度:2NNaOH配制量:100ml配制方法:1.量取80ml去離子水置于100~200ml塑料燒杯中(NaOH溶解過程中大量放熱,有可能使玻璃燒杯炸裂)。2.稱取8gNaOH小心地逐漸加入到燒杯中,邊加邊攪拌。3.待NaOH完全溶解后,用去離子水將溶液體積定容至100ml。4.將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后,室溫保存。NHCl組份濃度:NHCl配制量:100ml配制方法:1.在ml的去離子水中加入ml的濃鹽酸(N),均勻混合。2.室溫保存。5MNaCl組份濃度:5MNaCl配制量:1L配制方法:1.稱取gNaCl置于1L燒杯中,加入約800ml的去離子水后攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至1L后,適量分成小份。3.高溫高壓**后,4℃保存。20%(W/V)Glucose組份濃度:20%(W/V)Glucose配制量:100ml配制方法:1.稱取20gGlucose置于100~200ml燒杯中,加入約80ml的去離子水后,攪拌溶解。2.加去離子水將溶液定容至100ml。
生物緩沖液pH計(jì)校正及使用方法
生物緩沖液在實(shí)驗(yàn)分析中經(jīng)常被用到,它的作用是穩(wěn)定溶液的pH值。然而,很多人在實(shí)驗(yàn)中會(huì)遇到無法調(diào)節(jié)緩沖液pH值的情況,這是為什么呢?如何解決這個(gè)問題呢?下面我將詳細(xì)介紹。首先,從目前使用的pH計(jì)來看,國產(chǎn)的pH計(jì)或酸度計(jì),校正緩沖液時(shí)需要注意以下兩種情況:
1、購買市場(chǎng)上配置好的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在聚乙烯瓶中密封儲(chǔ)存。如果在室溫條件下保存1-2個(gè)月后,若出現(xiàn)渾濁、沉淀或發(fā)霉等情況,就不能繼續(xù)使用了。已經(jīng)使用過的校正緩沖液也不能再倒回去使用。2、購買緩沖劑并自己配置。大部分廠家生產(chǎn)的緩沖劑都是干燥型的pH緩沖劑,使用時(shí)需要將其溶解在之前煮沸15-30分鐘的去離子水中,然后倒入250ml容量瓶中,稀釋至刻度,充分搖勻即可。 緩沖液濃度和溫度的影響。
3.高溫高壓**后,4℃保存。SolutionI(質(zhì)粒提取用)組份濃度:25mMTris-HCl(),10mMEDTA,50mMGlucose配制量:1L配制方法:1.量取下列溶液,置于1L燒杯中。2.高溫高壓**后,4℃保存。3.使用前每50ml的SolutionI中加入2ml的RNaseA(20mg/ml)。SolutionII(質(zhì)粒提取用)組份濃度:200mMNaOH,1%(W/V)SDS配制量:500ml配制方法:1.量取下列溶液,置于500ml燒杯中10%SD50ml2NNaOH50ml2.加**水定容至500ml,充分混勻3.室溫保存,此溶液保存時(shí)間比較好不要超過一個(gè)月注意:SDS易產(chǎn)生氣泡,不要?jiǎng)×覕嚢鑃olutionIII(質(zhì)粒提取用)組份濃度:3MKOAc,5MCH3COOH配制量:500ml配制方法:1.稱量下列試劑,置于500ml燒杯中。2.加入300ml去離子水后攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至500ml。4.高溫高壓**后,4℃保存。MEDTA()組份濃度:MEDTA配制量:1L配制方法:1.稱取gNa2EDTA·2H2O,置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢琛?.用NaOH調(diào)節(jié)pH值至(約20gNaOH)。注意:pH值至,EDTA才能完全溶解。4.加去離子水將溶液定容至1L。5.適量分成小份后,高溫高壓**。6.室溫保存。1MDTT組份濃度:1MDTT配制量:20ml配制方法:1.稱取gDTT,加入到50ml塑料離心管內(nèi)。2.加20ml的MNaOAc()。酶活性實(shí)驗(yàn)中緩沖液的作用。北京無酚紅緩沖液是什么
在生物體中有三種主要的pH緩沖體系.新疆無酚紅緩沖液報(bào)價(jià)
所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行,與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。3.苯酚平衡:因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相,因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到,苯酚平衡操作方法如下:①液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃,此時(shí)的苯酚呈結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫,然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。②加入羥基喹啉(8-Quinolinol)至終濃度。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑,同時(shí)因其呈黃色,有助于方便識(shí)別有機(jī)相。③加入等體積的1MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。④重復(fù)操作步驟③。⑤加入等體積的MTris-HCl(),使用磁力攪拌器攪拌15分鐘,靜置使其充分分層后,除去上層水相。⑥重復(fù)操作步驟⑤,稍微殘留部分上層水相。⑦使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于。⑧將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)配制方法:1.說明:從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離,而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。新疆無酚紅緩沖液報(bào)價(jià)