云南胰酶常見問題

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機(jī)化合物，常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候，需要有Ca或Mg離子的參與，EDTA與他們結(jié)合后，導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用。難消化的細(xì)胞，胰酶中可填加EDTA。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響，那么可不離心。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請(qǐng)放心使用。云南胰酶常見問題

胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)在已經(jīng)擴(kuò)展到多種來源，包括哺乳動(dòng)物（人、牛、豬和狗）、無脊椎動(dòng)物和微生物等。胰蛋白酶的商業(yè)化生產(chǎn)主要依賴哺乳動(dòng)物的胰腺組織提取或者重組表達(dá)提取。直接從哺乳動(dòng)物胰腺組織中提取的缺點(diǎn)是生產(chǎn)成本高，易造成其他結(jié)構(gòu)相近的蛋白污染。重組表達(dá)提取胰蛋白酶可以縮短提取時(shí)間、降低生產(chǎn)成本，提取的蛋白純度高，通過優(yōu)化重組表達(dá)體系可以提高蛋白的表達(dá)量，這些優(yōu)勢(shì)為其在醫(yī)療、食品等行業(yè)中的應(yīng)用提供了更多的可能性。[1]折疊黑龍江胰酶價(jià)格對(duì)比消化液經(jīng)過過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細(xì)胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法。酶消化法：貼壁干細(xì)胞酶消化傳代時(shí)通常采用兩種方式：1、加入胰酶等干細(xì)胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；2、加入胰酶后，鏡下觀察待干細(xì)胞開始脫落時(shí)，棄去胰酶，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對(duì)干細(xì)胞施加胰酶選擇，因?yàn)榭偸琴N壁不牢的干細(xì)胞先脫落。

1、胰酶是，就是說PBS,注意，盡量不要用水來溶，因?yàn)橐３譂B透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細(xì)胞可不加。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對(duì)有些細(xì)胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時(shí)候**易溶解，在配制時(shí)可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測(cè)pH，隨時(shí)調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細(xì)胞會(huì)受不了。6、胰酶EDTA相對(duì)比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾**。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時(shí)間和濾器，用的時(shí)候?qū)ι?*PBS即可。8、儲(chǔ)存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時(shí)候不要放在27度水浴鍋溫浴，因?yàn)檫@樣會(huì)讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會(huì)。不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

    在253nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在～，作為底物溶液。制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加～60胰蛋白酶單位的溶液。測(cè)定法取底物溶液，加μl，混勻，作為空白。另取供試品溶液200μl，加底物溶液（恒溫于℃±℃），立即計(jì)時(shí)，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在253nm的波長(zhǎng)處，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖；每30秒鐘吸光度的改變應(yīng)恒定在～，呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度，再作測(cè)定。在上述吸光度對(duì)時(shí)間的關(guān)系圖中，取成直線部分的吸光度，按下式計(jì)算：式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量，單位；A1為直線上終止的吸光度；A2為直線上開始的吸光度；T為A1至A2讀數(shù)的時(shí)間，分；W為測(cè)定液中含供試品的量，mg；，吸光度每分鐘改變，即相當(dāng)于1個(gè)胰蛋白酶單位。胰蛋白酶制劑注射用胰蛋白酶[3]胰蛋白酶胰蛋白酶的醫(yī)學(xué)檢查胰蛋白酶檢查名稱胰蛋白酶胰蛋白酶分類血液生化檢查>酶類測(cè)定胰蛋白酶胰蛋白酶的測(cè)定原理同酶速率法測(cè)定。胰酶細(xì)胞消化液(不含EDTA)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。河南胰酶市場(chǎng)報(bào)價(jià)

胰酶用0.05%還是0.25%的？需不需要含酚紅的？云南胰酶常見問題

0.25%胰酶和加了EDTA胰酶區(qū)別是什么詳細(xì)說明

細(xì)胞之間是通過CAM（細(xì)胞粘性分子）相連的，而很多粘性分子只有在有+2價(jià)金屬離子，如Ca2+,Mg2+，的存在下才能行使這種功能。EDTA是鈣離子的鰲合劑，在胰酶中加入EDTA的作用簡(jiǎn)單的說就是為了增加胰酶的消化作用，尤其適用于比較難于消化的細(xì)胞；同時(shí)可以減少胰消化時(shí)間，以減少酶對(duì)細(xì)胞的損傷作用。加入EDTA的消化反應(yīng)不能通過加入培養(yǎng)液終止，必須離心才能去除EDTA，所以要掌握好消化時(shí)間。 云南胰酶常見問題