體外培養(yǎng)時,一定的濃度范圍條件下,葡萄糖主要經(jīng)糖酵解循環(huán)轉(zhuǎn)化成乳酸來為細胞提供能量。(氨基酸)氨基酸在細胞內(nèi)的重要生理作用主要體現(xiàn)在以下幾個方面:①是蛋白質(zhì)的基本組成單位,用于合成蛋白質(zhì)和多肽;②可用于合成某些具有重要生理作用的含氮化合物,如核酸、尼克酰胺等;③某些氨基酸還具有獨特的生理作用,如甘氨酸參與生物轉(zhuǎn)化作用,丙氨酸和谷氨酰胺參與細胞內(nèi)氨的運輸?shù)龋虎芸赊D(zhuǎn)變成糖類和脂肪,參與氧化供能。細胞所能利用的氨基酸是L型同分異構(gòu)體,D型氨基酸不能被利用。不同的細胞對氨基酸的需求各異,但有些必需氨基酸是細胞不能自身合成的,必須依靠外源的細胞培養(yǎng)液提供。其余非必需氨基酸,細胞可以自己合成,或通過轉(zhuǎn)氨作用由其他物質(zhì)轉(zhuǎn)化而來,但是在細胞培養(yǎng)基中添加適當濃度的非必需氨基酸可以減輕細胞在合成方面的負擔,提高谷氨酰胺及其它必需氨基酸的利用率。絕大部分細胞對谷氨酰胺有較高的要求,可能因其不僅是細胞的主要氮源,且可作為細胞生長的能源物質(zhì)和嘌呤、嘧啶核苷酸的前體,另外還可直接作為細胞增殖和產(chǎn)物合成中的蛋白質(zhì)和多肽的組成成分。在缺少谷氨酰胺時,細胞會生長不良,甚至死亡。由于谷氨酰胺具有多種生理作用。F12培養(yǎng)基支持多種細胞的生長和增殖。浙江F12培養(yǎng)基
此法由巴斯德創(chuàng)立,用于酒類消毒而得名。目前用于牛乳消毒。方法有兩種:一種為℃加熱15秒,另一種為63-66℃加熱30分鐘。大多采用第一種方法。(2)煮沸法。在1個大氣壓下,水煮沸后溫度達100℃,煮沸5分鐘后可殺死一般**繁殖體。如于水中加入2%碳酸鈉,可將其沸點提高至105℃,既可促進芽胞的殺滅,又可防止金屬器皿生銹。(3)流通蒸氣消毒法。又稱常壓蒸氣消毒法,常用附諾(Amold)流通蒸氣**器,利用1個大氣壓下100℃水蒸氣進行消毒,10-30分鐘后**繁殖體被殺死,但對芽孢作用不大。(4)間歇**法(fractionalsterilization)。采用間歇方式達到**目的。將**物品置于阿諾流通蒸氣**器內(nèi),100℃加熱15-30分鐘,每日1次,連續(xù)3次。每次**后取出物品置37℃孵育箱過夜,致殘存的芽胞發(fā)育成繁殖體,次日再通過流通蒸氣**器加熱而被殺滅。如此反復,既可殺滅芽胞,又可使不耐高溫的物質(zhì)免受影響。若某些物質(zhì)不耐100攝氏度,則可將溫度下降至75-80℃,每次加熱時間延長到30-60分鐘,常用血清凝固器對呂氏血清培養(yǎng)基和L-J培養(yǎng)基的**屬此方法。(5)高壓蒸氣火菌法。利用密閉的耐高壓蒸氣**器(autoclave),在蒸氣不外溢的條件下,使鍋內(nèi)壓力增高,隨之蒸氣溫度也增高。通常在℃。中國臺灣DMEM/F12培養(yǎng)基生產(chǎn)企業(yè)無酚紅培養(yǎng)基避免了酚紅對細胞的潛在毒性作用。
若應用于植物培養(yǎng)中的液體培養(yǎng)基制作,可不用調(diào)節(jié)ph,用超純水(ph為)充分溶解后定容,便可直接應用于大多數(shù)植物水培。培養(yǎng)實例1:哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)(1)種子保存及消毒方法:a、擬南芥種子保存方法:哥倫比亞(col,columbia)型擬南芥種子成熟后,收取種子于,加入3-8顆變色**干燥劑,用封口膜密封后置于4℃長期保存;b、擬南芥種子**消毒方法:取出經(jīng)低溫干燥保存的種子,于無菌環(huán)境下,將適量種子置于無菌,加入適量體積的無菌水,將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s,小心倒掉上清,重復3次;加入75%酒精,將離心管顛倒幾次后用低速離心機離心10s,小心倒掉上清;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入適量體積的5%naclo溶液,將離心管上下顛倒10-20次,低速離心10s后倒掉上清,重復2次;用無菌水清洗3次,低速離心10s后去除上清;加入無菌水,使種子完全浸泡在無菌水中,于4℃放置48h后播種。在種子質(zhì)量良好的情況下,利用上述方法保存及消毒的無菌擬南芥種子,萌發(fā)率極高且?guī)缀跬瑫r出苗。(2)生長培養(yǎng)基配制:1/2cs基本培養(yǎng)基+蔗糖30g/l+植物凝膠8g/l,用超純水溶解,。1/2cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。。
將未發(fā)生霉變的帶有胚的一半種子用于愈傷**誘導實驗;b、**消毒:于無菌環(huán)境下,將挑選的種子置于無菌三角瓶中,用無菌水清洗3-5次,75%酒精搖動清洗5min,無菌水清洗3-5次,5%naclo浸泡30min(期間每隔5-10min搖動30s),清水洗3-5次,種子表面的無菌水可用干燥的無菌濾紙吸去。(2)配制誘導培養(yǎng)基:cs基本培養(yǎng)基+,用超純水溶解,。cs基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。(3)愈傷**的誘導方法:用彎頭鑷子將無菌種子的缺口一端傾斜插入cs水稻成熟胚愈傷**誘導培養(yǎng)基,胚貼于培養(yǎng)基表面;于溫度24-26℃、濕度50-70%、光照強度1500-2500lux、光照和黑暗交替(光照時間16h、黑暗時間8h)條件下培養(yǎng)。(4)cs誘導培養(yǎng)基的誘導結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,經(jīng)cs誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。對比培養(yǎng)例7:將cs基本培養(yǎng)基替換為ms基本培養(yǎng)基,其余完全同培養(yǎng)實例7,ms基本培養(yǎng)基的成分及用量如表1所示。ms誘導培養(yǎng)基的誘導結(jié)果為:水稻成熟胚愈傷**誘導時,經(jīng)ms誘導培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)12-14d產(chǎn)生大量淡黃色結(jié)構(gòu)致密的團狀愈傷**,出愈率為100%。如圖7所示。MEM培養(yǎng)基適合多種類型的細胞培養(yǎng)實驗。
它*需要很小的實驗品牌:IBS型號:MEDIACLAVE&MEDIAJET參考報價:面議轉(zhuǎn)1854血液增菌培養(yǎng)基中制備實驗檢測方案(抗體試劑盒)實驗原理:供血液和骨髓液病原菌的增菌培養(yǎng)。血液增菌培養(yǎng)基主要用于血液和骨髓液病原菌的增菌培養(yǎng)。品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬制備微生物檢測培養(yǎng)基細節(jié)問題制*廠潔凈車間的節(jié)能設計節(jié)能是我國可持續(xù)展開計謀中的首要能源政策。然則,歷久以來,*廠潔凈室設計中針對的首要矛盾是微粒及**空氣過濾器,而節(jié)能問題不時未惹起高度注重。跟著我國GMP達標*廠的潔凈室樹立局限疾速展開與擴展,品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬Masterclave――培養(yǎng)基自動制備儀80℃),溫度超過設定溫度℃自動示警,超溫自動斷電,超壓,可全程**監(jiān)控整個**過程的溫度變化,打印出溫度變化?曲線、操作員姓名、培養(yǎng)基批號、**溫度和時間、分裝時間品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬***部分:實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則***部分:實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則品牌:安捷倫型號:1260Lnifntiy參考報價:20萬-50萬Systec培養(yǎng)基制備分裝系統(tǒng)德國SystecMediaPrep系列培養(yǎng)基制備儀。無血清培養(yǎng)基適合于無血清環(huán)境的細胞培養(yǎng)。陜西基礎培養(yǎng)基是什么
DMEM培養(yǎng)基在實驗室中廣泛應用于細胞實驗。浙江F12培養(yǎng)基
**早開發(fā)的基礎培養(yǎng)基(minimalessentialmedium,MEM),其本質(zhì)為含有鹽、氨基酸、維生素和其他必需營養(yǎng)物的pH緩沖的等滲混合物。在此基礎上,DMEM、IMDM、HAMF12、PRMI1640等各種合成細胞培養(yǎng)基被不斷開發(fā)出來。常用合成培養(yǎng)基的配方此處不詳細介紹,其特性及應用的范圍見表1-2。表1-2常用合成培養(yǎng)基的特性及應用的范圍培養(yǎng)基名稱特性及應用范圍199細胞培養(yǎng)基添加適量的血清后,可***用于多種細胞培養(yǎng),并用于**學、*苗生產(chǎn)等。MEM細胞培養(yǎng)基MEM(MinimalEssentialMedium)培養(yǎng)基有含Earle's平衡鹽的類型,也有含Hanks'平衡鹽的類型;有高壓**型的,也有過濾**型的;還有含非必需氨基酸的類型。是**基本、適用范圍**廣的細胞培養(yǎng)基。DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM(Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium)是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎上改良獲得的,各成分份量加倍,分低糖(1000mg/L)、高糖(4500mg/L)兩種類型。細胞生長快。附著稍差的腫*細胞、克隆培養(yǎng)用高糖效果較好,常用于雜交*的骨髓*細胞和DNA轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)化細胞培養(yǎng)。IMDM細胞培養(yǎng)基IMDM(Iscove’smodifiedDMEM)是由Iscove在DMEM基礎上改良,增加了幾種氨基酸和胱氨酸量等??捎糜陔s交*細胞培養(yǎng)。浙江F12培養(yǎng)基