湖南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

胰酶分裝凍存時(shí)要注意什么？胰酶分裝時(shí)盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因?yàn)槔鋬霰４鏁r(shí)體積會(huì)膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會(huì)降低消化效果并增大污染的可能性。5、怎么才能判斷胰酶消化完全？注意：不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才表示消化好了。一般肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙狀移動(dòng)就可以了，就應(yīng)該停止消化。6、胰酶適用于哪些細(xì)胞消化？它的消化效果與哪些有關(guān)呢？胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶的消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。胰蛋白酶溶液作為細(xì)胞分離試劑廣泛應(yīng)用于貼壁細(xì)胞的連續(xù)培養(yǎng)。湖南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑)，半貼壁細(xì)胞或者對胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。胰酶對細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大，如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑，盡量減少對細(xì)胞膜上蛋白的損傷。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。湖南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好胰蛋白酶可以用于原代細(xì)胞的傳代過程中分散組織。

對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機(jī)化合物，常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候，需要有Ca或Mg離子的參與，EDTA與他們結(jié)合后，導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用。難消化的細(xì)胞，胰酶中可填加EDTA。EDTA對細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。胰酶細(xì)胞消化液(不含EDTA)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過長,否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會(huì)較差。

    使**或細(xì)胞片分散成單個(gè)細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。影響消化速度的因素較多，主要有胰酶溶液的活性（配制條件、凍存或4℃保存時(shí)間長短、是否反復(fù)凍融、化凍后存放時(shí)間及溫度等）、消化時(shí)的溫度（氣溫、細(xì)胞培養(yǎng)瓶及胰酶溶液的溫度）以及所加胰酶溶液的多少等。加入胰蛋白酶-EDTA溶液，視細(xì)胞瓶的大小加入體積為2ml或更多（依培養(yǎng)器皿的大小而定），以使充分浸潤；一般消化時(shí)間約為1至3分鐘，肉眼觀察瓶底由半透明（細(xì)胞單層連接成片）轉(zhuǎn)為透明、點(diǎn)狀（出現(xiàn)細(xì)小空隙）時(shí)，棄去細(xì)胞消化液，或看見培養(yǎng)瓶壁呈白茫狀即可。并加入適量的完全培養(yǎng)液終止消化，吹打分散；如見大量細(xì)胞片狀脫落，已消化過頭，則不能頃倒消化液而直接進(jìn)行下一步操作。（消化過頭，可造成大量細(xì)胞從瓶壁上脫下，甚至造成細(xì)胞破碎。由于血清含有非特異性胰蛋白酶抑制劑，所以加入完全培養(yǎng)基可以終止反應(yīng)。胰酶配置方法：1、培養(yǎng)液配制，方便好用，對細(xì)胞影響小，并且培養(yǎng)液的ph值正好適合胰蛋白酶的溶解2、生理鹽水配制，要先調(diào)ph值（①胰酶（1：250）克②EDTA-Na③NaCl④KCl⑤Glucose⑥PhenolRed⑦Water1000mL磁力攪拌2-3小時(shí)，調(diào)pH，過濾**。）3、pbs（：稱取胰酶粉末。胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運(yùn)輸。海南胰酶

胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。湖南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

0.25%胰酶是細(xì)胞生物學(xué)中常用的一種生物試劑，下面匯總一下胰酶使用過程中常見的一些問題。胰酶的使用濃度是多少？胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異？商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸，在運(yùn)輸過程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運(yùn)輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運(yùn)輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn)。湖南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好