江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑

    第三節(jié)培養(yǎng)基的高壓**及效果驗(yàn)證消毒**在醫(yī)學(xué)實(shí)踐上有著重要意義。它可切斷傳播途徑、控制***擴(kuò)散造成的危害；也可殺滅物品或器皿上的**，防止醫(yī)院***；在醫(yī)學(xué)微生物檢驗(yàn)的領(lǐng)域中，消毒**是保正***的病原學(xué)檢驗(yàn)不受外來(lái)微生物污染的前提。（一）術(shù)語(yǔ)消毒(disinfection)、火菌(sterilization)、抑菌(bacteriostasis)、防腐（antisepsis）和無(wú)菌(asepsis)是常用術(shù)語(yǔ)。下面就術(shù)語(yǔ)概念加以敘述。(1)**。是用適當(dāng)?shù)奈锢砘蚧瘜W(xué)手段將物品中活的微生物殺滅或除去的方法。本法適用于制劑、原料、輔料及醫(yī)療器械等物品的**。（如外科器械、注射器、基礎(chǔ)培養(yǎng)基**等。）(2)消毒。是破壞物體上活的病原微生物的方法，但不包括**芽胞和非病原微生物。如用酒精溶液浸泡體溫計(jì)、新潔爾滅液擦拭檢查臺(tái)等。用于消毒的化學(xué)物品稱(chēng)消毒劑(dis-infectant)。一般而言，消毒對(duì)象是指物體而不是機(jī)體。(3)防腐。直接使用防腐劑(antiseptics)破壞或**活的病原微牛物的方法。如外科手術(shù)前碘液擦洗皮膚、雙氧水清創(chuàng)傷口或**肥皂清冼雙手等。(4)無(wú)菌。防止***病原體進(jìn)入****或物品的操作技術(shù)稱(chēng)無(wú)菌操作。無(wú)菌即為不存在活的微生物。用于消毒**的物理方法有熱力、電離輻射、超聲波、過(guò)濾等。無(wú)血清培養(yǎng)基適用于需要無(wú)血清環(huán)境的細(xì)胞。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑

    2-羥基乙胺可以促進(jìn)磷脂酰乙醇胺細(xì)胞壁組分的合成，從而提高菌株增殖速率，后期菌株增殖放緩，以產(chǎn)酸為主，2-羥基乙胺還能夠作為陽(yáng)離子表面活性劑，使得細(xì)胞壁疏松，提高細(xì)胞通透性，促進(jìn)谷氨酸釋放到發(fā)酵液；cecl3稀土鹽能夠促進(jìn)菌株增殖，提高谷氨酸相關(guān)合成酶的活力，提高谷氨酸的產(chǎn)量；但是過(guò)高的濃度會(huì)造成菌株增殖放緩和死亡，谷氨酸產(chǎn)量相應(yīng)下降；發(fā)酵中后期，菌株增殖速度放緩，以產(chǎn)酸為主，殼聚糖上的氨基與**細(xì)胞壁中帶負(fù)電荷的磷壁酸或脂多糖結(jié)合，并螯合mg2+、ca2+等陽(yáng)離子,從而改變細(xì)胞壁的通透性，促進(jìn)谷氨酸分泌到胞外。發(fā)酵培養(yǎng)基中添加了琥珀酸，三羧酸循環(huán)有一定促進(jìn)作用，而對(duì)乙醛酸循環(huán)途徑具有**作用，從而導(dǎo)致中間代謝物更多地流向三羧酸循環(huán)途徑，進(jìn)而促進(jìn)谷氨酸產(chǎn)量的增加。說(shuō)明書(shū)附圖圖1：cecl3稀土鹽對(duì)菌體濃度的影響；圖2：cecl3稀土鹽對(duì)谷氨酸含量的影響；圖3：2-羥基乙胺對(duì)菌體濃度的影響；圖4：2-羥基乙胺對(duì)谷氨酸含量的影響；圖5：2-羥基乙胺對(duì)糖酸轉(zhuǎn)化率的影響。具體實(shí)施方式為了使本技術(shù)領(lǐng)域：的人員更好地理解本申請(qǐng)中的技術(shù)方案，下面將結(jié)合本申請(qǐng)具體實(shí)施例，對(duì)本申請(qǐng)的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然。甘肅基礎(chǔ)培養(yǎng)基使用減血清培養(yǎng)基可以減少細(xì)胞培養(yǎng)中的血清干擾因素。

    MEM低血清培養(yǎng)基的平衡鹽系統(tǒng)也不是常規(guī)的平衡鹽系統(tǒng)，該平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力強(qiáng)于常規(guī)平衡鹽系統(tǒng)的緩沖能力。細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中pH值下降產(chǎn)生的原因有很多。在細(xì)胞生長(zhǎng)非?？鞎r(shí)，pH值通常下降得很快，此時(shí)可以通過(guò)及時(shí)傳代、提高傳代比例或降低血清量等方法進(jìn)行解決。此外，培養(yǎng)瓶蓋擰得過(guò)緊、NaHCO3緩沖系統(tǒng)緩沖能力不夠、培養(yǎng)液中鹽濃度不正確、**、酵母或***污染等也能導(dǎo)致pH值通常下降得很快。這時(shí)，可以通過(guò)以下幾種方法解決：1）增加培養(yǎng)液中NaHCO3濃度或減少培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度。NaHCO3含量在；2)改用不依賴(lài)CO2培養(yǎng)液；3)適當(dāng)松開(kāi)瓶蓋。在培養(yǎng)液中加HEPES緩沖液，使終濃度為10~25mM；4)在CO2培養(yǎng)環(huán)境中改用基于Earle’s鹽配制的培養(yǎng)液，在大氣培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)改用Hanks’鹽配制的培養(yǎng)液；5)如果是污染造成的則丟棄培養(yǎng)物或用*****。酚紅在細(xì)胞培養(yǎng)基中用作pH值的指示劑。一般情況下，可以通過(guò)酚紅的指示作用判斷培養(yǎng)基的pH值，但低血清或是無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基中酚紅的含量與普通細(xì)胞培養(yǎng)基中的酚紅含量不同，不能通過(guò)肉眼觀察或通過(guò)經(jīng)驗(yàn)來(lái)判定pH值，建議使用pH計(jì)進(jìn)行測(cè)定。酚紅通常對(duì)含血清的細(xì)胞培養(yǎng)基生產(chǎn)的生物制品質(zhì)量并不會(huì)產(chǎn)生明顯影響，也可通過(guò)純化技術(shù)去除。

    體外動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)需要大量谷氨酰胺，利用量常超過(guò)其他必須氨基酸利用量的總和。維生素是維持細(xì)胞生長(zhǎng)的生物活性物質(zhì)，在細(xì)胞代謝中起調(diào)節(jié)及控制作用。維生素可分為水溶性和脂溶性?xún)深?lèi)，水溶性維生素主要包括泛酸、維生素B12、葉酸、煙酰胺、吡哆醛、硫胺素、核黃素、維生素C、膽堿、肌醇等；脂溶性維生素主要包括維生素A、D、E、K等；有的培養(yǎng)液中還直接采用ATP和輔酶A；大部分培養(yǎng)基中還有生物素。許多維生素參與構(gòu)成各種酶的活性基團(tuán)的成分，沒(méi)有它們，酶便沒(méi)有活性，代謝活動(dòng)將無(wú)法進(jìn)行。比如，泛酸可以在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變成?；d體蛋白和輔酶（如輔酶A），參與糖類(lèi)、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)代謝中的催化反應(yīng)；維生素B12則在細(xì)胞內(nèi)參與葉酸的合成和脂肪酸的合成等。不同配方的細(xì)胞培養(yǎng)基中維生素的濃度有較大差異。例如，DMEM培養(yǎng)基中維生素的含量約為MEM培養(yǎng)基的兩倍，其原因是一方面不同種類(lèi)維生素的作用不同，另一方面不同種類(lèi)的細(xì)胞對(duì)維生素的需求也可能有較大差異，相應(yīng)細(xì)胞培養(yǎng)基的配方中維生素的含量也可能不同。無(wú)機(jī)鹽是細(xì)胞維持生命活動(dòng)所不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分，主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl－、PO43—、SO42—、HCO3－等，主要作用為維持細(xì)胞培養(yǎng)液滲透壓平衡。無(wú)酚紅培養(yǎng)基確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高度準(zhǔn)確性。

    式中：N0—開(kāi)始**（t=0）時(shí)原有活菌數(shù)；Nt----經(jīng)時(shí)間t后殘存活菌數(shù)。k：意義同上；t：表示理論**時(shí)間k=（）logNt/N0；比死亡速率常數(shù)K，K值大，表明微生物容易死亡。理論**時(shí)間的計(jì)算需要注意以下幾個(gè)問(wèn)題：（1）K值因不同的微生物種類(lèi)不同、不同的生理狀態(tài)、不同的外界環(huán)境，差別很大，實(shí)質(zhì)上，它是微生物熱阻的一種表示形式，微生物的熱阻越大，K值也越小?？梢匀∧蜔嵝匝挎邨U菌的K進(jìn)行計(jì)算。(2)在計(jì)算過(guò)程中，N0，Nt如何取值？N0為**開(kāi)始時(shí)培養(yǎng)基中活微生物數(shù)，可以參考一般培養(yǎng)基中的活微生物數(shù)為（1-2）×107個(gè)/ml；Nt通常取，既**失敗的概率為千分之一。（3）上述**時(shí)間，通常稱(chēng)之為理論**時(shí)間，只可以用于工程計(jì)算中，在實(shí)踐過(guò)程中，因蒸汽的壓力問(wèn)題（不穩(wěn)定）、蒸汽的流量問(wèn)題有很大差別，甚至培養(yǎng)基中的固體顆粒的大小、培養(yǎng)基的粘度等因素，都會(huì)影響**效果，實(shí)際的設(shè)計(jì)和操作計(jì)算時(shí)間可作適當(dāng)比例的延長(zhǎng)或縮短。在實(shí)際生產(chǎn)中，通常采用經(jīng)驗(yàn)數(shù)值：間歇**，121℃，20—30分鐘；連續(xù)**，137℃，15—30s，在維持罐中保溫8—20分鐘。4、**溫度的選擇在培養(yǎng)基**過(guò)程中，除了雜菌死亡，還伴隨著培養(yǎng)基成分的破壞。因此必須選擇既能達(dá)到**目的。使用減血清培養(yǎng)基減少了實(shí)驗(yàn)中血清帶來(lái)的變異性。陜西減血清培養(yǎng)基一般多少錢(qián)

無(wú)酚紅培養(yǎng)基在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中減少了干擾因素。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑

    生產(chǎn)上一般采用冷水噴淋冷卻，冷卻到40-50℃后，輸送到預(yù)先已經(jīng)**過(guò)的罐內(nèi)。（四）、間歇**與連續(xù)**的比較1、歇**的***和缺點(diǎn)***是設(shè)備要求低，不需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作要求低，適于手動(dòng)操作，適合于小批量生產(chǎn)規(guī)模；適合于含有大量固體物質(zhì)的培養(yǎng)基的**。缺點(diǎn)是培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較多，**后培養(yǎng)基的質(zhì)量下降；需進(jìn)行反復(fù)的加熱和冷卻，能耗較高；不適合于大規(guī)模生產(chǎn)過(guò)程的**；發(fā)酵罐的利用率較低。2、連續(xù)**的***和缺點(diǎn)***是**溫度高，可減少培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的損失；操作條件恒定，**質(zhì)量穩(wěn)定；易于實(shí)現(xiàn)管道化和自控操作；避免了復(fù)的加熱和冷卻，提高了熱的利用率；發(fā)酵設(shè)備利用率高。缺點(diǎn)是對(duì)設(shè)備的要求高，需另外設(shè)置加熱、冷卻裝置；操作較麻煩；染菌的機(jī)會(huì)較多；不適合于含大量固體物料的**；對(duì)蒸汽的要求高。由此可見(jiàn)，無(wú)論在理論上或者在實(shí)踐上，與間歇**過(guò)程相比，連續(xù)**的***十分明顯。因此，連續(xù)**越來(lái)越多地被用培養(yǎng)基的**。江蘇F12培養(yǎng)基答疑解惑