淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?能,對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,請(qǐng)放心使用。細(xì)胞消化時(shí),胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響?細(xì)胞消化時(shí),如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒(méi)有問(wèn)題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要徹底清洗去除,否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存0.25%胰酶細(xì)胞消化液(含有EDTA,含酚紅)消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)。新疆進(jìn)口胰酶報(bào)價(jià)
只斷裂賴氨酸或精氨酸胰蛋白酶原的***過(guò)程的羧基參胰蛋白酶降解物分析與形成的肽鍵。白色或米黃色結(jié)晶性粉末。溶于水,不溶于乙醇、甘油、氯仿和**。分子量24000,pI,**適pH值~。pH>。Ca2+對(duì)酶活性有穩(wěn)定作用;重金屬離子、有機(jī)磷化合物、DFP、天然胰蛋白酶**劑對(duì)其活性有強(qiáng)烈**。臨床用于抗消腫,工業(yè)上用于皮革制造、生絲處理、食品加工等。胰蛋白酶*典標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶來(lái)源含量本品系自豬、羊或牛胰中提取的蛋白分解酶。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。胰蛋白酶制法要求本品應(yīng)從檢*合格的牛、羊或豬胰中提取,生產(chǎn)過(guò)程應(yīng)符合現(xiàn)行版《*品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。胰蛋白酶性狀本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末。胰蛋白酶鑒別取本品約2mg,置白色點(diǎn)滴板上,加對(duì)甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯鹽酸鹽試液,即顯紫色。胰蛋白酶檢查酸度取本品,加水溶解并制成每1ml中含2mg的溶液,依法測(cè)定(2010年版*典二部附錄ⅥH),pH值應(yīng)為~。溶液的澄清度取本品,加,依法檢查(2010年版*典二部附錄ⅨB),溶液應(yīng)澄清。糜蛋白酶-底物溶液的制備取N-乙酰-L-酪氨酸乙酯,置100ml量瓶中,加磷酸鹽緩沖液(取,混合,pH值為)50ml,溫?zé)崾谷芙?,冷卻后再稀釋至刻度,搖勻。浙江重組胰酶價(jià)格信息消化同種細(xì)胞時(shí)含EDTA的胰酶消化時(shí)間會(huì)比不含EDTA時(shí)間短。
先用少許**過(guò)的PBS調(diào)成糊狀,然后補(bǔ)足到100ml。置室溫?cái)嚢?小時(shí)或冰箱內(nèi)過(guò)夜,過(guò)濾**,分裝,4℃保存?zhèn)溆?。?或是hanks或是D-hanks液配制(1.稱取胰蛋白酶粉末置燒杯中,先用少許D-Hanks平衡鹽溶液(左右)調(diào)成糊狀,然后再補(bǔ)足D-Hanks平衡鹽溶液,攪拌混勻,置室溫4小時(shí)或冰箱過(guò)夜,并不斷攪拌振蕩;2.次日,先用濾紙粗濾,再進(jìn)行過(guò)濾**,分裝入瓶中,低溫冰箱保存?zhèn)溆?,常用濃度為或。胰蛋白酶溶液偏酸,使用前可調(diào)用碳酸氫鈉溶液調(diào)pH至左右。)一般**,至于作用效果,需要消化一次細(xì)胞感覺(jué)一下,因?yàn)椴煌瑥S家的酶不一樣,有的作用溫和,有的作用劇烈。4、是否需要四度放置過(guò)夜,取決于你的胰酶的純度。過(guò)去的胰酶純度不高,所以難以溶解,需要四度過(guò)夜.而現(xiàn)在的胰酶純度都很高,就沒(méi)有必要四度過(guò)夜。從理論上來(lái)說(shuō),四度放置過(guò)夜,給**生長(zhǎng)的機(jī)會(huì),盡管過(guò)濾可以出去**,可是出不掉其代謝產(chǎn)物。胰蛋白酶不溶,有絮狀物的原因,考慮有:1、過(guò)期或是酶已經(jīng)部分變性2、溶液ph值不對(duì)3、在沒(méi)過(guò)濾之前的絮狀沉淀是正常現(xiàn)象,因胰酶多取自動(dòng)物胰腺,沉淀為**塊。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介產(chǎn)品簡(jiǎn)介:產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱產(chǎn)品包裝產(chǎn)品價(jià)格C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml碧云天生產(chǎn)的胰酶細(xì)胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含。該消化液經(jīng)過(guò)過(guò)濾**,可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些**的消化。本胰酶細(xì)胞消化液具有方便快速的特點(diǎn),通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。包裝清單:產(chǎn)品編號(hào)產(chǎn)品名稱包裝C0201胰酶細(xì)胞消化液100ml―說(shuō)明書1份保存條件:4℃保存,一年有效。注意事項(xiàng):在使用胰酶細(xì)胞消化液的過(guò)程中要特別注意避免消化液被**污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),否則細(xì)胞鋪板后生長(zhǎng)狀況會(huì)較差。為了您的安全和**,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。使用說(shuō)明使用說(shuō)明:1.貼壁細(xì)胞的消化:a)吸去培養(yǎng)液,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。b)加入少量胰酶細(xì)胞消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。c)顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。d)如果發(fā)現(xiàn)消化不足。胰蛋白酶水解或胰蛋白酶化是蛋白質(zhì)被胰蛋白酶消化或處理的過(guò)程,因此被稱為胰蛋白酶化。
①制備粗酶液稱取定量粗胰酶,其胰蛋白酶活性為,胰淀粉酶活性為,胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0.2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解,然后進(jìn)行真空過(guò)濾,收集濾液并用磷酸緩沖液進(jìn)行稀釋,使胰蛋白酶活性為3-10U/mg,備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重,放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取,加入10L異辛烷,在攪拌下使其形成均勻的分散液,再加入定量蒸餾水,在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h,獲得濃度為。使用時(shí)用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,按照AOT異辛烷反膠束:粗酶溶液體積比為(2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次,,在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后,均進(jìn)行離心分離,離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間10-15min收集、合并離心上層清液,進(jìn)行反萃取,下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中,在攪拌下加入等體積的反萃取液進(jìn)行反萃取15-20min萃取液為0.。如此反萃取3次,每次萃取完成后,均進(jìn)行離心分離,離心機(jī)轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時(shí)間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液,前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 胰蛋白酶是一種異源蛋白酶,與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。江蘇胰酶代理商
胰蛋白酶消化液都由已經(jīng)過(guò)豬細(xì)小病毒檢測(cè)和支原體檢測(cè)的原料制備。新疆進(jìn)口胰酶報(bào)價(jià)
胰酶操作步驟:
(*供參考) :1. 吸取培養(yǎng)基,用無(wú)菌的PBS、Hanks液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以除去殘余的血清。2. 加入適量的胰蛋白酶消化液,略蓋過(guò)細(xì)胞即可。根據(jù)細(xì)胞的特性可以增加或減少胰酶用量,室溫放置30秒至2分鐘。(不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同)3. 顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化呈白茫狀;或者用***吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)。4. 此時(shí)吸除胰酶細(xì)胞消化液。加入含血清的完全細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細(xì)胞消化液重新消化。 新疆進(jìn)口胰酶報(bào)價(jià)