胰蛋白酶(Trypsin)簡(jiǎn)稱胰酶,是一種絲氨酸水解酶,能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng),以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中,均會(huì)使用到胰蛋白酶消化液,用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使組織或細(xì)胞離散成單個(gè)細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強(qiáng)。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子,胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解,起到增強(qiáng)消化的效果。酚紅是一種pH指示劑,溶液偏堿性時(shí)呈紫紅色,偏酸性時(shí)呈橘紅色,近中性時(shí)呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液,含0.25%胰蛋白酶,溶于Hank’s緩沖液,不含EDTA,無酚紅指示劑,經(jīng)0.22μm過濾除菌。胰酶濃度:常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。貴州胰酶進(jìn)口
胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為8.0、溫度為37°℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性,所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS,如:D-Hanks液。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。貴州胰酶進(jìn)口消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的?
常用的消化酶有:胰酶:用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大,從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞,在37度條件下,一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液,否則影響活性。保存于-20度。膠原酶:膠原酶是比較少用的,一般是用原代培養(yǎng)時(shí),從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和,對(duì)干細(xì)胞損傷較小,但是,價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一,如果配的比較標(biāo)準(zhǔn),消化的時(shí)候就容易消化,反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下,如果干細(xì)胞下來的比較多了,這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清,胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化,但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞,加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶,先中和血清的作用(30s),棄之,再加入適量胰酶作用10s-40s(根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度),棄之,這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。
細(xì)胞培養(yǎng)胰蛋白酶生物制品簡(jiǎn)介中文名稱:胰蛋白酶中文同義詞:胰蛋白酶;胰蛋白酶1:250(豬胰臟);胰蛋白酶1:300(豬胰臟);胰淀粉酶;胰液酵素;胰酶-EDTA溶液;胰蛋白酶1:250;蛋白酶類英文名稱:Trypsin英文同義詞:TRYPSIN;TRYPSIN,1-250;TRYPSIN,1-300;TRYPSIN-EDTA;TRYPSIN,HUMANPANCREAS;TRYPSINPORCINE;TRYPSIN,PORCINEPANCREAS;CAS號(hào):9002-07-7分子式:C6H15O12P3分子量:≈24000EINECS號(hào):232-650-8胰蛋白酶物化性質(zhì)胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取,純化獲得的結(jié)晶,再制成的凍干制劑。易溶于水,不溶于三氯甲烷、乙醇、**等有機(jī)溶劑。在,短時(shí)間煮沸幾乎不失活;在堿溶液中加熱則變性沉淀,Ca2+有保護(hù)和***作用,胰蛋白酶的等電點(diǎn)為。牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成,含6對(duì)二硫鍵,其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下,酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解,釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽,生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè),分子量23800[2],活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似,在氨基酸殘基排列順序中,只有41個(gè)氨基酸殘基不同。胰蛋白酶是一種異源蛋白酶,與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。
胰蛋白酶:(Trypsin)為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟提取的一種絲氨酸蛋白水解酶。由223個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽,主要切割賴氨酸和精氨酸羧基端。按干燥品計(jì)算,每1mg中胰蛋白酶的活力不得少于2500單位。作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān),在pH為、溫度為37℃時(shí),胰酶溶液的作用能力**強(qiáng)。使用胰酶時(shí),應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間,以免消化過度造成細(xì)胞損傷。終止消化時(shí),可用含有血清培養(yǎng)液終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。有些細(xì)胞容易消化(如雞胚原代成纖維細(xì)胞)可用胰酶進(jìn)行消化,可以不加EDTA。 EDTA是乙二胺四乙酸,一種金屬螯合劑。福建國產(chǎn)胰酶報(bào)價(jià)
胰酶可在-20℃下保存一年。貴州胰酶進(jìn)口
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎?能,對(duì)于胰酶呈黃色的問題,不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,請(qǐng)放心使用。細(xì)胞消化時(shí),胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響?細(xì)胞消化時(shí),如果消化液中只有胰酶,不含EDTA,不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA,比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,主要作用在于能螯合Ca、Mg離子,使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和,消化后要徹底清洗去除,否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,所以常二者合用。胰酶的保存貴州胰酶進(jìn)口