CFSE檢測(cè)法

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-02-21

1996年第yi次報(bào)道其蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)是一個(gè)包含有11個(gè)β折疊的“桶”形結(jié)構(gòu),發(fā)色團(tuán)隱藏在結(jié)構(gòu)的中心,不被水溶劑猝滅。這種緊密排列的結(jié)構(gòu)對(duì)整個(gè)GFP蛋白是很重要的,它幾乎可以完全維持熒光活性;少量的斷裂是可以平衡的,少量的點(diǎn)突變也是可以接受的。與當(dāng)時(shí)的傳統(tǒng)熒光染料相比,GFP的主要優(yōu)勢(shì)在于它無(wú)毒,并且可以在活細(xì)胞中表達(dá),從而能夠用于研究動(dòng)態(tài)的生理過(guò)程。

幾乎就在它的序列被闡明的同時(shí),科學(xué)家們就開(kāi)始通過(guò)誘導(dǎo)突變來(lái)設(shè)計(jì)新的綠色熒光蛋白版本。1995年,RogerY.Tsien描述了一個(gè)S65T點(diǎn)突變,該突變?cè)黾恿薌FP的熒光強(qiáng)度和光穩(wěn)定性。這也使其主激發(fā)峰從395nm轉(zhuǎn)移到488nm,有效地改善了野生型蛋白的缺陷,促進(jìn)了其在研究中的廣泛應(yīng)用。自那以后,許多其他的突變被引入到綠色熒光蛋白中,新的熒光團(tuán)迭代不斷地被設(shè)計(jì)出來(lái)。 試劑盒服務(wù) 量大價(jià)優(yōu),歡迎咨詢中喬新舟!CFSE檢測(cè)法

目前臨床中較為常見(jiàn)的病理標(biāo)本為石蠟包埋切片,通常在常溫下保存,其中的DNA往往會(huì)發(fā)生嚴(yán)重的降解,給后續(xù)測(cè)序帶來(lái)不小的挑戰(zhàn)(RNA的降解更加嚴(yán)重,因此一般不對(duì)病理切片中的RNA進(jìn)行測(cè)量)。為了克服這個(gè)難點(diǎn),提高基因突變的最低檢出限,目前常用的方法是在進(jìn)行高通量測(cè)序之前先用PCR對(duì)感興趣的那部分靶基因(targeted panel)進(jìn)行擴(kuò)增,這樣就可以以盡可能小的測(cè)序深度獲取盡可能多的基因突變信息,這樣的方法叫做Targeted NGS。上文列出的5種試劑盒均采用這種Targeted NGS方法針對(duì)特定的幾個(gè)基因進(jìn)行突變檢測(cè)。


小鼠elisa試劑盒熒光素酶(luciferase)是指能催化不同底物發(fā)生氧化使其發(fā)射出熒光的一類酶的總稱。

hela細(xì)胞*早起源于20世紀(jì)50年代早期的一種高度侵襲性的宮頸ai細(xì)胞,作為第yi個(gè)不朽的人類細(xì)胞系,hela細(xì)胞是目前世界上*受研究者歡迎的細(xì)胞系之一。hela細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中很容易繁殖,如果hela細(xì)胞污染了其他細(xì)胞,它們很快就會(huì)超過(guò)原來(lái)的細(xì)胞。因此,hela細(xì)胞污染已成為科學(xué)界的一個(gè)重大課題。由于細(xì)胞系中hela細(xì)胞污染的可能性很高,建議進(jìn)行常規(guī)評(píng)估。 

       Sciencell的Hela細(xì)胞污染檢測(cè)試劑盒(HLCC)專為敏感、快速和pcr法檢測(cè)人培養(yǎng)細(xì)胞中hela細(xì)胞污染的簡(jiǎn)易方法。hela基因組學(xué)DNA(gdna)檢測(cè)引物集(hld)識(shí)別并放大hela細(xì)胞特異性其他人類細(xì)胞中不存在的基因組序列。人類gdna控制引物集(hgc)識(shí)別并放大所有人類細(xì)胞共有的基因組區(qū)域。包括hela細(xì)胞。精心設(shè)計(jì)的引物沒(méi)有非特異性擴(kuò)增推薦PCR條件。每一組引物都經(jīng)過(guò)了PCR和凝膠驗(yàn)證電泳擴(kuò)增特異性。這種高度敏感的試劑盒可以檢測(cè)到低至20hela細(xì)胞/百萬(wàn)細(xì)胞。

Cell Counting Kit-8簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽),適用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)原理:WST-8屬于MTT的升級(jí)產(chǎn)品,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物(formazan)。顏色的深淺與細(xì)胞的增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450mM波長(zhǎng)處測(cè)定OD值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

用途:CCK-8法應(yīng)用非常廣fan,如藥物篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、**藥敏試驗(yàn)以及生物因子的活性檢測(cè)等。 GFP可以標(biāo)記轉(zhuǎn)基因修飾的ES細(xì)胞,然后可以將其用于轉(zhuǎn)入小鼠并產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因小鼠。

CCK8試劑盒提供了一種靈敏度高,操作簡(jiǎn)便,使用安全,重現(xiàn)性好的細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)方法。與傳統(tǒng)的MTT相比無(wú)需有機(jī)溶劑和放射性同位素,步驟少,無(wú)損失,結(jié)果準(zhǔn)確!本試劑盒檢測(cè)非常便捷。試劑盒jin一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,無(wú)須再進(jìn)行任何配制等操作 。無(wú)須使用同位素,所有的檢測(cè)步驟jin在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞,不必收集細(xì)胞,也不必采用額外的步驟去溶解formazan??梢杂糜诖笈繕悠返臋z測(cè)。1. MTT實(shí)驗(yàn)生成的甲臜不是水溶性的,需要使用DMSO等有機(jī)溶劑溶解;而本方法產(chǎn)生的甲臜是水溶性的,不僅省去了溶解的步驟,更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差。2. 與MTT方法相比,本方法線性范圍更寬,靈敏度更高。本方法對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性,因此加入WST-8顯色后,可以在不同時(shí)間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀數(shù)多次測(cè)定從而找到*佳測(cè)定時(shí)間。3. 本方法所用試劑在培養(yǎng)基中比MTT更加穩(wěn)定,實(shí)驗(yàn)效果重復(fù)性好。4. MTT具有毒性,同時(shí)其生成的甲臜需要有機(jī)溶劑溶解,會(huì)對(duì)操作人員身體造成危害。本試劑無(wú)毒,使用中無(wú)需有機(jī)溶劑,操作更加安全。5. 本試劑盒在4℃避光可長(zhǎng)期保存,使用無(wú)需配制,即開(kāi)即用。6. 酚紅和血清對(duì)CCK法的檢測(cè)不會(huì)造成干擾(扣除空白孔即可)熒光素酶通過(guò)載體構(gòu)建可以研究基因組織的特異性表達(dá);對(duì)一些細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移等變化進(jìn)行實(shí)時(shí)觀測(cè)和評(píng)估。小鼠elisa試劑盒

多重PCR允許通過(guò)在單個(gè)反應(yīng)混合物中使用多個(gè)引物對(duì)在單個(gè)PCR反應(yīng)中擴(kuò)增兩個(gè)或更多個(gè)基因。CFSE檢測(cè)法

每個(gè)研究生做論文實(shí)驗(yàn)幾乎就是一個(gè)接著一個(gè)使用不同試劑盒的過(guò)程。按純化對(duì)象分為核酸純化試劑盒與蛋白純化試劑盒。核酸又分為DNA與RNA;蛋白又分為基因表達(dá)融合蛋白與天然蛋白;天然蛋白又分為總蛋白與細(xì)胞器分組蛋白。絕大部分試劑盒都是由瓶裝試劑與離心柱或磁珠組成。目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)很多品牌做核酸純化試劑盒,但是試劑盒品類齊全的品牌并不多。蛋白純化試劑盒幾乎沒(méi)有真正意義上的產(chǎn)品,多是一管裂解液而已,客戶操作完,樣品必須接著進(jìn)一步純化才可以使用。使用我們的蛋白純化試劑盒,用雙柱法,產(chǎn)物可以直接跑要求為嚴(yán)格的雙向電泳。之前也沒(méi)有一家品牌既有全系列核酸純化試劑盒又全系列蛋白純化試劑盒。 CFSE檢測(cè)法

上海中喬新舟生物科技有限公司

1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。

2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。

4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過(guò)STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。

5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。

6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。