注意事項:1、酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成干擾,可以通過減去空白孔中本底的吸光度而消除。2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色,與含酚紅的培養(yǎng)基顏色接近,不注意的話容易產(chǎn)生漏加或多加。3、當(dāng)在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時,培養(yǎng)板*外一圈的孔容易干燥揮發(fā),導(dǎo)致體積不準(zhǔn)確而增加誤差。一般情況下,*外一圈的孔只加培養(yǎng)基,不作為測定孔用。4、金屬對CCK-8顯色有影響:終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會5%、15%、90%的抑zhi顯色反應(yīng),使靈敏度降低。如果終濃度是10mM,將會100%抑zhi顯色反應(yīng)。5、部分懸浮細(xì)胞由于染色比較困難,一般需要增加細(xì)胞數(shù)量并延長培養(yǎng)時間。CCK-8試劑盒可以用于生物活性因子的活性檢測,抗**藥物的篩選,細(xì)胞增值的測定。FLNb試劑盒
就eGFP而言,相對于GFP,其熒光強度更強、熒光性質(zhì)更穩(wěn)定。mCherry是從DsRed演化來的性能*好的一個單體紅色熒光蛋白,可以和GFP系列熒光蛋白共用,實現(xiàn)多色標(biāo)記。熒光蛋白活性和被融合的目標(biāo)蛋白功能相互沒有明顯影響。這些熒光標(biāo)簽蛋白,其融合表達(dá)目的蛋白后具有以下優(yōu)點:1.不用破碎組織細(xì)胞和不加任何底物,直接通過熒光顯微鏡就能在活細(xì)胞中發(fā)出綠色熒光,實時顯示目的基因的表達(dá)情況,而且熒光性質(zhì)穩(wěn)定,被譽為活細(xì)胞探針。2.其自發(fā)熒光,不需用目的基因的抗體或原位雜交技術(shù)就可推知目的基因在細(xì)胞中的定位等情況。3.同時細(xì)胞內(nèi)的其它產(chǎn)物不會干擾標(biāo)簽蛋白檢測,從而使其檢測更顯得快速、簡便、靈敏度高而且重現(xiàn)性。4.其低消耗、高靈敏度檢測,十分適用于高通量的藥物篩選。因此現(xiàn)eGFP表達(dá)標(biāo)簽被廣fan地應(yīng)用于基團表達(dá)調(diào)控、轉(zhuǎn)基因功能研究、蛋白在細(xì)胞中的功能定位、遷移變化及藥物篩選等方面。5.mCherry紅色熒光蛋白在標(biāo)記病毒顆粒,研究病毒和宿主細(xì)胞之間更有得天獨厚的優(yōu)勢。如用mRFP或mCherry標(biāo)記HIV病毒顆粒,研究HIV和宿主細(xì)胞問的相互作用以及HIV侵染宿主細(xì)胞的過程.用mRFP標(biāo)記慢病毒顆粒,研究慢病毒在小鼠體內(nèi)的復(fù)制過程等。宿主細(xì)胞蛋白研究者可以利用光來檢測、測量和控制分子信號、細(xì)胞和細(xì)胞群,以便了解它們的活動。
腺病毒與其他病毒工具比較,具有以下優(yōu)勢:a.是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的*佳系統(tǒng):腺病毒感ran細(xì)胞后,1-2天即可表達(dá),是研究原代非增殖細(xì)胞基因表達(dá)的*佳系統(tǒng);b.滴度高:腺病毒系統(tǒng)在轉(zhuǎn)有E1基因的HEK293細(xì)胞中可進(jìn)行自我復(fù)制,可產(chǎn)生滴度為1010到1011PFU/mL的病毒;c.載體容量大:可容納不超過5kb的片段;d.不整合到染色體中,無插入致突變性:腺病毒除卵細(xì)胞以外,幾乎在所有已知細(xì)胞中都不整合到染色體中,因此避免了因整合而引發(fā)的潛在的基因突變和隨機效應(yīng)。
AAV在基因傳遞和表達(dá)的優(yōu)勢1.宿主范圍廣:隨時可轉(zhuǎn)染的 AAV 可高效感ran分裂和非分裂細(xì)胞;2.多種血清型 :AAV1,AAV2, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8 和 AAV9 等;3.安全性高:ITR 序列和 rep/cap 基因分別由獨li的質(zhì)粒表達(dá);未發(fā)現(xiàn) AAV 對人體致 病,rAAV 去除了 wtAAV 基因組的96%,進(jìn)一步保證了安全性;4.免疫原性低:AAV2 的基因組jin 4681 個核苷酸,便于用常規(guī)的重組 DNA 技術(shù)進(jìn)行操作,而且進(jìn)行動物實驗時造成的免疫反應(yīng)??;5.擴散性強:AAV可以穿透血腦屏障,是*理想的神經(jīng)元和膠質(zhì)神經(jīng)下感ran工具。
與正常細(xì)胞相比,ai細(xì)胞的代謝機制會發(fā)生變化,以滿足增殖的需求,使其成為判斷ai變的一個重要因素。ai細(xì)胞內(nèi)代謝的改變增加了其大分子的生物合成,創(chuàng)出了新的微環(huán)境以應(yīng)對活性氧 (ROS) 的增加。這種代謝改變背后的驅(qū)動因素包括基因表達(dá)的改變以及代謝酶活性的改變。
代謝檢測是一個復(fù)雜的過程,為了簡化繁瑣的操作,快速獲得數(shù)據(jù),各種檢測試劑盒應(yīng)運而生。Abcam也提供各類代謝檢測試劑盒,科研用戶只需通過酶標(biāo)儀、顯微鏡或流式細(xì)胞儀,就可直接讀取活細(xì)胞、裂解液和生物流體樣本的數(shù)據(jù)即可。 ELISA試劑盒,抗體檢測才是趨勢。
hela細(xì)胞*早起源于20世紀(jì)50年代早期的一種高度侵襲性的宮頸ai細(xì)胞,作為第yi個不朽的人類細(xì)胞系,hela細(xì)胞是目前世界上*受研究者歡迎的細(xì)胞系之一。hela細(xì)胞在培養(yǎng)過程中很容易繁殖,如果hela細(xì)胞污染了其他細(xì)胞,它們很快就會超過原來的細(xì)胞。因此,hela細(xì)胞污染已成為科學(xué)界的一個重大課題。由于細(xì)胞系中hela細(xì)胞污染的可能性很高,建議進(jìn)行常規(guī)評估。
Sciencell的Hela細(xì)胞污染檢測試劑盒(HLCC)專為敏感、快速和pcr法檢測人培養(yǎng)細(xì)胞中hela細(xì)胞污染的簡易方法。hela基因組學(xué)DNA(gdna)檢測引物集(hld)識別并放大hela細(xì)胞特異性其他人類細(xì)胞中不存在的基因組序列。人類gdna控制引物集(hgc)識別并放大所有人類細(xì)胞共有的基因組區(qū)域。包括hela細(xì)胞。精心設(shè)計的引物沒有非特異性擴增推薦PCR條件。每一組引物都經(jīng)過了PCR和凝膠驗證電泳擴增特異性。這種高度敏感的試劑盒可以檢測到低至20hela細(xì)胞/百萬細(xì)胞。 熒光素酶(luciferase)是指能催化不同底物發(fā)生氧化使其發(fā)射出熒光的一類酶的總稱?;虼貦z測試劑盒
在用酶標(biāo)儀檢測結(jié)果的時候,為了保證實驗結(jié)果的線性,MTT 吸光度盡量在0-0.7 范圍內(nèi)。FLNb試劑盒
實驗注意事項:建議先做幾個孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時間。有條件的情況下建議采用多通道移液器,可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時,建議斜貼著培養(yǎng)板壁加,不要插到培養(yǎng)基頁面下加,容易產(chǎn)生氣泡,會干擾OD值讀數(shù)。白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板時,貼壁細(xì)胞的*小接種量至少為1,000 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時的靈敏度相對較低,因此推薦接種量不低于2,500 個/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗,請先計算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。如果沒有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片,但是450nm濾光片的檢測靈敏度*高。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基,去掉藥物的影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。FLNb試劑盒
上海中喬新舟生物科技有限公司
1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實驗檢測試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實驗。