然而,這些復雜的方法無法進行大規(guī)模的實驗,在2D單層培養(yǎng)中維持分化的PHH依然重要。在這方面,近測試了一組化學物質(zhì),而且鑒定了5種補充劑的一個組合(5C-medium,5C培養(yǎng)基),包括Forskolin(腺苷酸環(huán)化酶抑制劑),SB431542(TGF-β抑制劑),IWP2(Wnt抑制劑),DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑),可以維持PHH分化狀態(tài)30天。不同于DMSO處理需要14天,F(xiàn)orskolin可以在72h內(nèi)誘導HepaRG細胞發(fā)生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養(yǎng)條件下使肝祖細胞樣細胞分化,并用HBV它們。盡管這些發(fā)現(xiàn)都很重要,但是這些化學藥品可能會影響抗病毒藥物的評價。 原代肝細胞的租賃行情,貴不貴?歡迎來電咨詢上海中喬新舟!廣東小鼠肝細胞 CD-1原代肝細胞購買
傳代培養(yǎng):1.倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài),確定細胞是否需要傳代。2.培養(yǎng)液瓶打開后,過酒精燈火焰,置酒精燈火焰周圍。3.拿出直頭滴管,套上橡皮吸頭,過火,放入培養(yǎng)液瓶中。4.打開培養(yǎng)瓶,瓶口過火,將培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液輕輕倒入廢液缸,用2-3mLPBS洗去殘留的舊培養(yǎng)基。5.培養(yǎng)瓶加入,用量以薄薄蓋滿一層為宜,37℃消化,倒置顯微鏡下觀察到細胞收回突起變圓時立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉,加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基。6.取彎頭滴管反復吹打細胞使其脫壁并分散,再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基,制成細胞懸液,然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋,適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn),以利于CO2氣體的進入,將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。7.對半貼壁培養(yǎng)細胞,不需胰酶,直接吹打,加入新鮮培養(yǎng)基,然后分裝到各瓶中。 云南大鼠原代肝細胞屬于什么細胞歡迎致電上海中喬新舟咨詢 原代肝細胞。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!
HBV是一種包膜DNA病毒,只能在高度分化的人肝細胞中復制。HBV的復制模板以游離的、共價閉合的環(huán)狀DNA(cccDNA)形式存在于細胞的核中。批準使用的核苷(酸)類似物可以有效抑制病毒血癥,但它們無一靶向cccDNA,也就不能有效地徹底乙肝。因此,進行體外研究來鑒定和開發(fā)新的抗病毒策略,尤其是沉默或降解cccDNA的策略非常有必要。由于肝細胞是HBV的天然靶細胞,因此新鮮制備或高質(zhì)量的冷凍人原代肝細胞(PHH)是HBV體外研究的金標準。PHH是非轉(zhuǎn)化細胞,對HBV高度易感并有效支持HBV復制的所有步驟。但由于從分離后接種到塑料培養(yǎng)皿上它們就開始去分化,在一段時間的體外培養(yǎng)后會失去對HBV的敏感性(即使是在比較好的2D培養(yǎng)條件下)。
細胞傳代常用的儀器和試劑傳代細胞時,使用無菌技術(shù)和合適的試劑及設備尤為重要。針對您的細胞系選擇合適的培養(yǎng)液來得到比較好的生長和擴增很關鍵。每一個細胞系都有特定的生長營養(yǎng)組分配方,但是大多數(shù)細胞系起碼需要的添加物有以下這些:血清,如胎牛血清,需熱處理滅活其胎牛成分,它為細胞生長提供重要的生長因子。,如青霉素和鏈霉素用于防止細胞污染。其他的生長因子,如成纖維細胞生長因子,有助于延長細胞系的生長和擴增。不使用時,要將這些添加物或者“完全”細胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細胞培養(yǎng)液的顏色,富含營養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當細胞耗盡培養(yǎng)液中的營養(yǎng)成分時,開始在培養(yǎng)物中積累廢物和酸性物質(zhì),降低pH值。因此,許多細胞培養(yǎng)液含有酚紅,當培養(yǎng)物呈酸性時會將培養(yǎng)液顏色由橙色變?yōu)辄S色。培養(yǎng)液需在變黃之前更換。當酚紅變?yōu)榉奂t色時,說明培養(yǎng)基pH偏堿,不利于細胞健康生長。這時可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養(yǎng)液。 原代肝細胞去哪找?上海中喬新舟告訴您。
目前,NAFLD動物模型和細胞模型仍然是研究NAFLD發(fā)病機制及藥物防治的重要手段。動物模型雖然能很好地模擬體內(nèi)環(huán)境,但是存在造模周期長、個體差異大、實驗結(jié)果難以控制等問題,而細胞模型個體差異小、影響因素較少、實驗條件可控性強[8-11]。鑒于細胞模型能較好地克服動物模型的不利因素,因此,建立NAFLD體外細胞模型對于研究其發(fā)病機制,為進一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實用價值。肝脂肪變性細胞模型是公認的研究NAFLD有效的細胞模型,目前多采用肝細胞株HepG2,通過給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1),誘導造模[12-13],但因HepG2細胞株來源于腫瘤細胞,與正常生理條件下的肝細胞仍存在著差異[14]。因此采用健康C57BL/6J小鼠的原代肝細胞建立脂肪變性細胞模型,旨在建立一種更接近于臨床的肝細胞脂肪變性模型,為NAFLD的研究奠定基礎。 原代肝細胞的特點分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟!中國香港兔肝細胞(家兔)原代肝細胞價格
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藥物性肝損傷(DILI)是臨床常見的肝損傷類型,是嚴重的藥物不良反應之一。細胞死亡是DILI的重要特征,藥物可通過誘導內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和死亡受體等方式凋亡通路,誘導肝細胞凋亡或壞死,誘發(fā)肝損傷。除凋亡和壞死外,DILI過程中還伴隨著自噬、焦亡和鐵死亡。自噬可以去除受損的蛋白質(zhì)以及細胞器,是肝細胞存活的重要機制,但也可能誘導肝細胞死亡。焦亡和鐵死亡是近發(fā)現(xiàn)的細胞死亡方式,其在DILI中的作用尚未完全闡明。阻斷肝細胞死亡通路,是DILI的重要手段。水飛薊素、柚皮素、人參皂苷等可以抑制肝細胞死亡通路,是DILI的潛在藥。針對不同細胞死亡方式的機制和特點,研究改善肝細胞死亡的藥物對DILI具有重要意義??偨Y(jié)了DILI中肝細胞死亡的機制,并論述了潛在的藥物。 廣東小鼠肝細胞 CD-1原代肝細胞購買
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1、原代細胞:ScienCell(中國區(qū)正規(guī)一級代理)人源和動物源各種原代細胞。
2、培養(yǎng)基:原代細胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細胞實驗檢測試劑盒、細胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細胞裂解物等。
4、細胞系(株):種類豐富(1000余種),已通過STR鑒定;提供細胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務:綠/紅色熒光蛋白標記、熒光素酶標記、慢bing毒介導基因沉默或過表達及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細菌基因敲除、細胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學實驗。