常見(jiàn)的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來(lái)源于一個(gè)15歲白人的肝組織；Hepa1-6來(lái)源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點(diǎn)，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會(huì)隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機(jī)體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時(shí)間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機(jī)體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類(lèi)細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化引起的，還是由其他細(xì)胞類(lèi)型所介導(dǎo)的時(shí)，使用小鼠肝臟組織是無(wú)法說(shuō)清問(wèn)題的，使用原代肝細(xì)胞能夠避免其他細(xì)胞的影響，從而得到更加準(zhǔn)確地結(jié)論。原代細(xì)胞相對(duì)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，更加可控，可給予的實(shí)驗(yàn)干預(yù)也更多。 原代肝細(xì)胞托運(yùn)有哪些步驟？歡迎來(lái)電咨詢(xún)上海中喬新舟！青海比格犬原代肝細(xì)胞系
原代肝細(xì)胞體外培養(yǎng)48h后，參照文獻(xiàn)[20-21]報(bào)道的方法誘導(dǎo)脂肪變性細(xì)胞模型。設(shè)置不同濃度(0～)的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，F(xiàn)FA混合物與含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基充分混勻后按濃度順序依次加入六孔板中，置于37℃、含5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24h后油紅O染色，觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積情況，并采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)TG含量。油紅O染色步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1～2次，加入油紅O固定液固定20～30min；棄去固定液，加入新鮮配制的油紅O染液染色10～20min；60%的異丙醇浸洗1～2min，三蒸水清洗2～3次直至無(wú)多余染液；加入蘇木素染液染色1～2min，油紅OBuffer清洗1min，晾干，倒置顯微鏡下觀察。細(xì)胞內(nèi)TG測(cè)定步驟：棄去六孔板中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液清洗1次，按每孔細(xì)胞數(shù)量加入150～250μL的RIPA裂解液，刮刀刮取細(xì)胞，冰上裂解30min，4℃，13000r/min，離心10min，取上清，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)肝細(xì)胞內(nèi)TG含量。 湖南脂肪原代肝細(xì)胞中喬新舟原代肝細(xì)胞的服務(wù)廠家排名。歡迎來(lái)電咨詢(xún)上海中喬新舟！
肝臟的一個(gè)明顯特征是其在受傷后具有突出的再生能力。對(duì)于失去再生能力的晚期肝病，的方法是肝移植。然而，由于短缺，肝移植的實(shí)際應(yīng)用受到限制。在臨床和動(dòng)物模型中，已經(jīng)評(píng)估了原代肝細(xì)胞的移植作為移植的替代方案。具有有效肝臟再增殖能力的人肝細(xì)胞（HH）對(duì)肝病的需求很大。然而，肝細(xì)胞移植的實(shí)際使用受到供體肝細(xì)胞的有限可用性和體外不能擴(kuò)增原代HH（PHH）的阻礙。已經(jīng)做出一些努力來(lái)揭示肝再生的機(jī)制并將這些發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為改善HH培養(yǎng)物。據(jù)報(bào)道，含氧或微制造的共培養(yǎng)物可使HHs保持代謝功能數(shù)周;然而，這些細(xì)胞失去了它們的增殖能力。另一項(xiàng)使用高通量篩選的研究發(fā)現(xiàn)，支持HH的小分子在一周內(nèi)擴(kuò)增約10倍。此外，由膽管來(lái)源的雙潛能細(xì)胞產(chǎn)生的人肝臟類(lèi)可以在體外長(zhǎng)期擴(kuò)增。然而，來(lái)自這些可擴(kuò)張的類(lèi)的細(xì)胞在移植中表現(xiàn)出差的性能。在其他研究中，努力通過(guò)用hTERT和病毒基因（例如SV40，E6和E7）永生化來(lái)擴(kuò)增HH。然而，使用這種獲得的細(xì)胞未證實(shí)體內(nèi)再增殖，并且hTERT和病毒基因的過(guò)表達(dá)在移植后具有發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。
Autotaxin(ATX)是一種分泌型溶血磷脂酶D，可催化溶血磷脂酰膽堿(LPC)水解為溶血磷脂酸(LPA)，這是一種多效性生長(zhǎng)因子樣磷脂。LPA通過(guò)其G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs;LPAR1-6)在幾乎所有細(xì)胞類(lèi)型中具有多種作用，表現(xiàn)出重疊的特異性和普遍分布。目前，在各種慢性炎癥性疾病和不同類(lèi)型的病癥中已檢測(cè)到上調(diào)的ATX表達(dá)。ATX被證明在肺纖維化的發(fā)展中起決定性作用；然而，對(duì)其在其他纖維增生性疾病中的作用和作用方式知之甚少。擴(kuò)展和補(bǔ)充先前的研究，我們已經(jīng)顯示不同病因的CLD中血清ATX水平升高，這與CLD和HCC患者的存活率降低以及肝臟ATXmRNA表達(dá)增加相關(guān)。因此，在實(shí)驗(yàn)性中毒性肝炎和HCC的動(dòng)物模型中顯示肝細(xì)胞ATX和肝LPA水平升高。體內(nèi)遺傳和藥理學(xué)干預(yù)以及離體研究表明，ATX會(huì)擾亂脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)并促進(jìn)纖維化和病癥的發(fā)展。 上海中喬新舟的 原代肝細(xì)胞是否結(jié)實(shí)耐用？歡迎來(lái)電咨詢(xún)上海中喬新舟！
細(xì)胞傳代常用的儀器和試劑傳代細(xì)胞時(shí)，使用無(wú)菌技術(shù)和合適的試劑及設(shè)備尤為重要。針對(duì)您的細(xì)胞系選擇合適的培養(yǎng)液來(lái)得到比較好的生長(zhǎng)和擴(kuò)增很關(guān)鍵。每一個(gè)細(xì)胞系都有特定的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細(xì)胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細(xì)胞生長(zhǎng)提供重要的生長(zhǎng)因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細(xì)胞污染。其他的生長(zhǎng)因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，有助于延長(zhǎng)細(xì)胞系的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。不使用時(shí)，要將這些添加物或者“完全”細(xì)胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，富含營(yíng)養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當(dāng)細(xì)胞耗盡培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)，開(kāi)始在培養(yǎng)物中積累廢物和酸性物質(zhì)，降低pH值。因此，許多細(xì)胞培養(yǎng)液含有酚紅，當(dāng)培養(yǎng)物呈酸性時(shí)會(huì)將培養(yǎng)液顏色由橙色變?yōu)辄S色。培養(yǎng)液需在變黃之前更換。當(dāng)酚紅變?yōu)榉奂t色時(shí)，說(shuō)明培養(yǎng)基pH偏堿，不利于細(xì)胞健康生長(zhǎng)。這時(shí)可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養(yǎng)液。 原代肝細(xì)胞的廠家哪個(gè)好？上海中喬新舟告訴您。重慶膠質(zhì)原代肝細(xì)胞
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原代肝細(xì)胞分離、培養(yǎng)及SOP，一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：ICR，4-6W二、實(shí)驗(yàn)器材：手術(shù)剪、手術(shù)鑷、玻璃皿、泵、注射器、一次性靜脈輸液器三、實(shí)驗(yàn)步驟：1、先注射，再注射，將小鼠麻醉，同時(shí)防止凝血。2、酒精消毒，用手術(shù)剪剪開(kāi)小鼠皮膚，暴露腹腔，可見(jiàn)鮮紅的肝臟，將腸挪到右側(cè)，胰腺也挪到右側(cè)，暴露出下方靜脈血管（門(mén)靜脈），再找到中間偏左腹腔靜脈（下腔靜脈）。3、右手取靜脈注射針平插入門(mén)靜脈遠(yuǎn)端，左手用鑷子夾住針頭及血管，防止其脫落，右手輕輕的松開(kāi)，左手保持不動(dòng)，啟動(dòng)泵，開(kāi)始導(dǎo)入預(yù)熱至37度的無(wú)鈣灌流液（G2），待充盈立起來(lái)（有的肝不明顯），右手持手術(shù)剪剪斷下腔靜脈，放流，使血液和灌流液流出?？捎^察到肝葉垂下來(lái)，然后右手持鑷子夾住下腔靜脈，停止放流。慢慢地，肝葉又充盈立起來(lái)，待肝葉完全立起來(lái)后，右手的鑷子松開(kāi)，放流，這個(gè)過(guò)程不斷循環(huán)，一般需要灌50-60ml?？捎^察到肝葉逐漸腫脹變?yōu)榈S色，肝葉立起來(lái)的現(xiàn)象漸漸不明顯。4、待下腔靜脈流出液接近無(wú)鈣灌流液，用注射器吸取5-6ml膠原酶1稀釋液（G3），接入灌肝裝置，慢慢推入，盡量控制五分鐘左右推完。整個(gè)期間，左手鑷子一直夾住靜脈插針和血管，不能松開(kāi)而使靜脈針脫落。。 青海比格犬原代肝細(xì)胞系
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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類(lèi)豐富（1000余種），已通過(guò)STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。