高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細(xì)胞的分離和純化方法.方法對傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進(jìn)行4個方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴(yán)格控制膠原酶消化時間和將分離的肝細(xì)胞懸液進(jìn)行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng).肝細(xì)胞活力和得率用臺盼藍(lán)染色法檢測.結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細(xì)胞活力能穩(wěn)定達(dá)到87%±3%,平均活細(xì)胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細(xì)胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長.結(jié)論優(yōu)化后的肝細(xì)胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細(xì)胞具有高活力的優(yōu)點. 上海的 原代肝細(xì)胞服務(wù)廠家。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！山西兔肝細(xì)胞(家兔)原代肝細(xì)胞系
生物醫(yī)學(xué)實驗中常常會用到細(xì)胞系，因為它們可以快速生長和擴增提供實驗分析要用到的細(xì)胞。細(xì)胞系與新分離的或原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件相類似，但也有一些基本不同的地方：（1）每個細(xì)胞系需要其特定的生長因子混合物。（2）與原代細(xì)胞相比，它們的生長需要更嚴(yán)密的監(jiān)測，因為使它們無限生長的突變同時也會造成它們很快達(dá)到過度生長。因此，當(dāng)細(xì)胞系生長到了幾乎覆蓋整個培養(yǎng)器皿底部，也就是90%的密度時，細(xì)胞需要重懸洗滌用于實驗或凍存以備將來使用，或者重新接種到新的培養(yǎng)器皿進(jìn)一步擴增。細(xì)胞傳代或續(xù)代培養(yǎng)是將細(xì)胞從現(xiàn)有的培養(yǎng)物分開或分出來開始新的培養(yǎng)，并加入新鮮培養(yǎng)液來促進(jìn)擴增的常用手段。盡管它的概念本身相對簡單，本短片中我們將討論能成功保存和擴增細(xì)胞系的一些更重要的步驟。 山西兔肝細(xì)胞(家兔)原代肝細(xì)胞系上海中喬新舟簡述 原代肝細(xì)胞規(guī)范標(biāo)準(zhǔn)。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
原代培養(yǎng)：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開皮膚一個橫切口，將皮膚向上撕開，然后剪開肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計數(shù)。7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。面做好標(biāo)志，注明細(xì)胞、組別及日期。然后將培養(yǎng)瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
結(jié)合國內(nèi)外小鼠原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)的方法并加以改良，成功獲得了產(chǎn)量高、活率高、純度高的原代肝細(xì)胞，在此基礎(chǔ)上采用不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)誘導(dǎo)貼壁的原代肝細(xì)胞，成功構(gòu)建了肝脂肪變性細(xì)胞模型，并且能夠很好地模擬體內(nèi)肝實質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)累積的現(xiàn)象。由于肝脂肪變性細(xì)胞模型還存在一定的局限性，如不能充分模擬肝臟局部微環(huán)境對NAFLD發(fā)病過程的影響，因此還需將細(xì)胞模型與動物模型相互聯(lián)系起來，使兩種模型相互補充，取長補短，為進(jìn)一步研究NAFLD的發(fā)病機制及藥物治療奠定基礎(chǔ)。尋找 原代肝細(xì)胞的專業(yè)生產(chǎn)廠家。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后，從一個容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個或幾個容器中擴大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以比較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細(xì)胞造成損傷。 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍十分廣闊。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！山西兔肝細(xì)胞(家兔)原代肝細(xì)胞系
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肝細(xì)胞作為細(xì)胞移植慢性肝衰竭的種子細(xì)胞以及作為藥物篩選的靶細(xì)胞，制備和培養(yǎng)大規(guī)模的、高活力的肝細(xì)胞是這些研究的基本環(huán)節(jié)。因此肝細(xì)胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)正日益受到人們關(guān)注，成為當(dāng)前研究的熱點。目前肝細(xì)胞的分離方法有機械分離法、螯合法和酶消化法等。機械法操作簡單，但分離獲得的肝細(xì)胞數(shù)量少、活性差。howard創(chuàng)建了膠原酶灌流法，seglen進(jìn)一步將這種方法發(fā)展為兩步灌流法。膠原酶灌流法得到的肝細(xì)胞數(shù)量和活性都得到提高，灌流法廣泛應(yīng)用于大鼠、小鼠、犬和兔等動物。但此方法對肝組織塊的體積要求較大，不適用于手術(shù)切除的不規(guī)則小塊人肝組織，無法滿足基礎(chǔ)研究中對人肝細(xì)胞的需求。因此，急需建立一種簡單、高效的分離培養(yǎng)人原代肝細(xì)胞的技術(shù)。 山西兔肝細(xì)胞(家兔)原代肝細(xì)胞系
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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國區(qū)正規(guī)一級代理）人源和動物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實驗檢測試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測/qing除試劑盒、端粒酶檢測試劑盒、人源/動物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實驗。