注意:嘌呤霉素比較好濃度的確定:首先是正常細(xì)胞必須全部死亡,其次就是根據(jù)各孔細(xì)胞死亡情況來(lái)確定,一般選擇死亡超過(guò)50%,細(xì)胞生長(zhǎng)速度較其它孔不會(huì)明顯降低。因?yàn)榧?xì)胞死亡少的話可能會(huì)有很多低表達(dá)量的細(xì)胞存在,如果細(xì)胞死亡過(guò)多,也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞擴(kuò)增很慢,不利于快速獲得穩(wěn)定細(xì)胞株;嘌呤霉素的濃度設(shè)置,可以去參考文獻(xiàn),根據(jù)文獻(xiàn)推薦的濃度來(lái)進(jìn)行梯度設(shè)置,如果沒(méi)有文獻(xiàn)支持,可以多設(shè)置梯度去篩選;選擇了比較好的嘌呤霉素濃度,不意味后面一直用這個(gè)濃度,要根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)情況來(lái)判斷,適時(shí)的去增減嘌呤霉素的濃度;細(xì)胞長(zhǎng)滿后盡快擴(kuò)大培養(yǎng)去檢測(cè)目的基因的表達(dá)情況,檢測(cè)方法一般是qPCR和WB;可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇是否要進(jìn)行單克隆細(xì)胞株的篩選。上海中喬新舟細(xì)胞株安心售后。河北耐藥細(xì)胞株shrna
常見(jiàn)細(xì)胞株:A2780細(xì)胞[人卵巢ai細(xì)胞]ATCC;細(xì)胞9L-B人前列腺ai細(xì)胞;9L-E人前列腺ai細(xì)胞;Acc-3人涎腺腺樣囊性ai細(xì)胞;A172人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;A2780細(xì)胞[人卵巢ai細(xì)胞]ATCC細(xì)胞;A2人腺樣囊性ai細(xì)胞;A-204人橫紋肌肉瘤;A2780人卵巢ai細(xì)胞;A3人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞;A2780細(xì)胞[人卵巢ai細(xì)胞]ATCC細(xì)胞;A-375人惡性黑色素瘤細(xì)胞;A375S2人黑色素瘤細(xì)胞;A-431人表皮ai細(xì)胞;A2780細(xì)胞[人卵巢ai細(xì)胞]ATCC細(xì)胞;A498人腎ai細(xì)胞;A549人肺腺ai細(xì)胞;A549/DDPA549耐藥細(xì)胞。河北耐藥細(xì)胞株shrna歡迎致電上海中喬新舟咨詢(xún)細(xì)胞株。
實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞株:A9 CRL-6319 小鼠 結(jié)締組織 成纖維細(xì)胞、貼壁 DMEM,10% FBS+;AR42J CRL-1492 大鼠 胰腺瘤 貼壁、上皮樣 Ham'sF-12K, 20%FBS;AtT-20 CCL-89 小鼠 垂體瘤 上皮細(xì)胞、貼壁 F-10, 15% HS和2.5% FBS;B95-8 CRL-2311 絨猴 EB病毒傳染的白血病細(xì)胞 成淋樣 RPMI-1640, 10% FBS;BALB/3T3 CCL-163 小鼠 胚胎 成纖維細(xì)胞、貼壁 DMEM, 10% FBS;bel7402 無(wú) 人 肝病 貼壁、上皮樣 RPMI-1640,15%FBS;BeWo CCL-98 人 絨毛病 上皮細(xì)胞、貼壁 F-12K, 15%F12;BHK-21 CCL-10 倉(cāng)鼠 腎 成纖維細(xì)胞、貼壁 MEM/NEAA, 10% FBS
請(qǐng)問(wèn)細(xì)胞株是如何建立的?過(guò)程就是——從患者身上取下病細(xì)胞——細(xì)胞培養(yǎng)——傳20-30代——形成穩(wěn)定的性狀——細(xì)胞株建立。取細(xì)胞不難,養(yǎng)細(xì)胞才難,人體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)豐富,病細(xì)胞非常頑固,但在體外,病細(xì)胞其實(shí)很脆弱。一個(gè)只能在顯微鏡下才能看到的細(xì)胞,要長(zhǎng)出近10億個(gè),看起來(lái)有拳頭大小,不死、不變形,才能為研究所用,才是一個(gè)合格的細(xì)胞株,目前全世界能成活的細(xì)胞株非常非常少。 上海中喬新舟生物科技有限公司產(chǎn)品線比較豐富:現(xiàn)有美國(guó)Sciencell(原代細(xì)胞及配套全能培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、檢測(cè)試劑盒、生長(zhǎng)因子等)、新一代無(wú)血清培養(yǎng)基、年產(chǎn)1000萬(wàn)毫升內(nèi)蒙古合作牛血清生產(chǎn)基地等。細(xì)胞株價(jià)格哪里有優(yōu)惠?
所以如果想獲得效果好的單克隆細(xì)胞株,建議是增加篩選的總量。很多研究者正是因?yàn)楹Y選總量不夠,或者的單克隆細(xì)胞株數(shù)量有限,也就導(dǎo)致了很難篩到效果好的細(xì)胞株。常規(guī)的篩選單克隆細(xì)胞株有兩種方法,原理是一樣的,操作上有些區(qū)別。1.有限稀釋法:將鑒定正確的混合克隆細(xì)胞株進(jìn)行傳達(dá)計(jì)數(shù),然后將細(xì)胞稀釋到每10ml50個(gè)細(xì)胞。再將細(xì)胞懸液接種96孔板,一般情況建議接種4塊,便于后續(xù)篩選到效果好的單克隆細(xì)胞株;2.第二種方法原理一樣,操作是:A1孔接種1000個(gè)細(xì)胞,縱向往下倍比稀釋?zhuān)缓笏械氖琢屑?xì)胞再橫向倍比稀釋。同樣建議接種4塊96孔板。細(xì)胞株去哪找?上海中喬新舟告訴您。河北耐藥細(xì)胞株shrna
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1、原代細(xì)胞:ScienCell(中國(guó)區(qū)正規(guī)一級(jí)代理)人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基:原代細(xì)胞**低血清、無(wú)血清、無(wú)異源蛋白無(wú)動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑:胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系(株):種類(lèi)豐富(1000余種),已通過(guò)STR鑒定;提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品:支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù):綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過(guò)表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建,細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。